第五章 抗体制药-课件.pptVIP

八、单克隆抗体生产的一般流程 体外培养的骨髓瘤细胞 免疫纯系小鼠，取脾脏细胞 体外融合 HAT选择培养 抗体检测，阳性孔 克隆化培养，抗体检测 阳性克隆扩大培养 冻存细胞，建立细胞库 体外法制备单克隆抗体 体内法制备单克隆抗体腹水 抗体检测 第四节 基因工程抗体 鼠单抗对人而言有较强得免疫原性，可以产生较强的人抗鼠抗体（HAMA）反应 生产成本比较高，难以大规模普及应用 基因工程抗体优点 降低抗体的免疫原性。通过基因工程改造技术，可以最大程度地降低抗体的鼠源性，降低甚至是消除人体对抗体的排斥反应 穿透力强。基因工程抗体分子一般比较小，更容易到达病灶的核心部位 可以根据需要，制备多用途的新型抗体 成本降低。可采用原核细胞、低等真核细胞和植物等多种系统表达 一、人－鼠嵌合抗体 在基因水平上将鼠源单克隆抗体可变区和人抗体恒定区连接起来并在合适的宿主细胞中表达，这种抗体称为人－鼠嵌合抗体 二、鼠单抗可变区人源化抗体 1. 改行(型)抗体 将鼠单抗的CDR区移植到人单抗的骨架区，就可能使人单抗获得同鼠一样的抗体特异性，并可以最大限度地降低鼠单抗的异源性，这样就得到了改行抗体。这种改造过的抗体也称CDR移植抗体 2. 表面氨基酸残基的人源化――镶面抗体 将鼠单抗可变区表面暴露的骨架区氨基酸残基中改成人源的，就成为了镶面抗体 3. 表位印迹选择 表位印迹选择是一种与高效筛选噬菌体抗体库技术相结合的人源化抗体的方法，可以通过数轮筛选得到完全人源的抗体 三、 小分子抗体 小分子抗体是完整免疫球蛋白的一部分，分子量比较小。 1）Fab片段和重组Fab。Fab片段包括重链Fd段（可变区和第一恒定区）和完整的轻链，如果恒定区片段是人源的，即称为重组Fab。 2）Fv和单链抗体（scFv），Fv是重链可变区和轻链可变区通过非共价键结合在一起，是抗体中完整活性的最小功能片段。ScFv是在两个可变区间用连接肽连接起来成为一条链。 双价分子、单域抗体、最小识别单位等。 Fv ScFv 单区抗体 最小识别单位 Fab * 第五章　 抗体工程制药 抗体药物的生产 传统的方法——抗血清 淋巴细胞的培养 如何获得需要的淋巴细胞？如何体外培养淋巴细胞？ 1997年全球抗体药物销售额为3.1亿美元，同期全球药品销售额为3028亿美元，市场份额为千分之一 到2008年，增长至400亿美元，同期全部药品销售7730亿美元，市场份额提升至5.2% 抗体药物年销售额复合增速高达56%，是总药品销售增速的6倍 2009年，美国FDA批准的6项新的生物制品许可申请中，有4只产品属于单抗药物, 欧洲7个 2010年 强生的抗肿瘤坏死因子(TNF)-α单克隆抗体Remicade销量达74亿美元 罗氏的Rituxan销售额达到65亿美元 罗氏的抗Her-2受体单克隆抗体赫赛汀 （Herceptin）销售额达到51亿美元 第一节 抗体药物概念及其特点 一、抗体药物概念 通过细胞工程或基因工程生产的，用于诊断或治疗的单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、基因工程改造的抗体或免疫偶联物统称为抗体药物 免疫偶联物 生物导弹 是免疫导向药物的形象称呼 由单克隆抗体与药物、酶、毒素或放射性同位素等配合而成 二、抗体药物特点 1. 特异性 1）与相关抗原的特异性结合 2）对靶细胞的选择性 2. 多样性 1）抗原多样性 2）结构多样性 3）抗体活性的多样性 4）免疫偶联物和融合蛋白的多样性 第二节 杂交瘤技术与单克隆抗体 1975年，德国学者Kohler和英国学者Milstein合作研究将经绵羊红细胞免疫后的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，建立了能持续分泌抗棉样细胞抗体的杂交瘤细胞，从而创立了具有划时代意义的新技术，为此获得了1984年医学诺贝尔奖 一、抗体的种类 1. 多克隆抗体 多克隆抗体含有两层意思：一是有含多个抗原位区的大分子刺激产生的、识别不同抗原位区的各种抗体；二是由体内不同淋巴细胞产生的、可针对同一抗原位区的多克隆抗体 2. 单克隆抗体 仅识别抗原分子上同一抗原位区的由同一克隆细胞产生的抗体为单克隆抗体 传统抗血清 抗 原 免 疫 所有抗体混