第九单元 免疫增殖病免疫学检验实验指导.pptVIP

第九单元 免疫增殖性疾病的免疫学检验;概 述;当临床上考虑为多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症或其它浆细胞恶变等免疫球蛋白病时，一般先以血清蛋白区带电泳、免疫球蛋白定量检测或尿本－周蛋白定性作为初筛实验。 如果发现有异常球蛋白区带，继而进行免疫固定电泳、免疫球蛋白亚型定量等检测做进一步定量分析和免疫球蛋白分类鉴定。;实验一血清免疫固定电泳实验;实验目的;实验原理;试剂与器材;Spife 3000全自动电泳仪;操作步骤;区带电泳 上样 胶片准备 电泳 ;沉淀反应;结果分析 ;弛仍瘪芯溉顿呜滓妹丫缩犁忱玉翌瘩腐咨门惧奴冯老减绳兆雇背蛤裸做屡第九单元 免疫增殖病免疫学检验实验指导第九单元 免疫增殖病免疫学检验实验指导;注意事项;某些单克隆蛋白质可能因多聚体而导致所有的免疫固定泳道上均出现单克隆片段。在这样情况下可加25μl还原剂（1％β-巯基乙醇）于75μl血清混匀并令其反应至少15min（至多3h)后按规定程序继续进行。 在电泳之前，凝胶与电泳槽的贴合面充满电泳介质，并确保两者之间无气泡。;在抗血清加入血清加样孔后，确保血清与凝胶之间无气泡。 染色之前的胶片一定要置于洗涤液中充分洗涤，以出去游离的血清和抗血清成分，降低染色后凝胶的背景色。;临床应用;思考题;实验二 血清IgG定量检测的可报告范围评价实验 ;可报告范围指可以报告的所有结果范围，包含两种类型的范围，即分析测量范围和临床可报告范围。 分析测量范围指对没有进行任何预处理（稀释，浓缩等）的标本，分析方法能够直接测定出的待测物范围，也就是系统最终的输出值（活性或浓度）与被分析物的活性或浓度成线性比例的范围，它反映整个系统的输出特性。;临床可报告范围 是指对临床诊断、治疗有意义的待测物浓度范围。此范围如果超出了分析测量范围，可将标本通过稀释、浓缩等预处理使待测物浓度处于分析测量范围内，最后结果乘以稀释倍数。 ;实验目的;实验原理;试剂与器材;操作步骤;结果分析;观察结果有无明显的数据差异，若有明显差异时，应判断是否为离群点。 在坐标纸上，以X表示各样品的预期值，以Y表示各样品的实测值，将实验结果点在图上。 若所有实验点在坐标纸上呈明显直线趋势，用直线回归对数据进行统计，得直线回归方程Y=bX+a，若b在0.97～1.03范围内，a接近于0，则可直接判断测定方法可报告范围在实验已涉及浓度。 若b不在0.97～1.03范围内，a较大，试着舍去某组数据，另作回归统计。若缩小分析范围后，回归式有明显改善，若b接近于1，a趋于0。此时，缩小的分析范围可作为真实的可报告范围。;注意事项;应仔细阅读试剂说明书，某些检测项目不适宜用稀释方法获取系列浓度的临床新鲜血清标本，可采用商品质控物、校准品等。 临床可报告范围的评价要对分析标本进行最大稀释度的评价实验，以此作为临床可报告范围的上限；如果低限有临床意义时，可增加分析标本反应量来进行检测下限评价实验，并以此作为临床可报告范围下限。 ;临床应用;思考题;病案讨论 免疫增殖性疾病;某患者，男，48岁。主述“乏力，脸色苍白，骨骼疼痛、背痛”六个月，体检发现：皮肤黏膜苍白，局限性骨骼压痛，伴肝脾肿大。辅助检查发现：（1）血象：Hb 8.2 g/dl，WBC血小板 红细胞、白细胞和血小板镜检形态学正常，分类可见幼粒、幼红细胞，红细胞呈缗钱状排列；（2）骨髓象：增生活跃，浆细胞占20％，并发现形态异常的骨髓瘤细胞。其余各系细胞大致正常；（3）骨X线片、CT或同位素扫描：可发现多部位穿凿样溶骨性病变或广泛性骨质疏松。;问 题