聚合酵素链锁反应.PDFVIP

海洋生物保育特論實驗操作單 元 –實驗 二之一 聚合酶 鏈鎖反應 原理 早 期的遺傳 學、分子生物學研究 基因時 ，要得 到大量的 DNA 片段 ，只能利 用活體 （in vivo ）細胞 系統進行 大量 生產，而無法於活體外 （in vitro ）複製DNA 。 這是 一個費時 耗力的 流程 ，首 先，需要 將DNA 片段 經限 制酶剪 裁，再利用 接合 l 酶 （ligase ）作用 而加到載體 （plasmid ）中 ，之後利用瞬間電擊 （electroporation ） 或是熱休克 （heat shock ）的 方式將此載體運送到大腸桿菌 勝任細胞中 進行 大量 a i 繁殖培養 ，再 經過繁複的 分離純化過程 ，時間通常 需要 3~5 天，才能得 到大量 r 複製的 DNA 。直到Dr. Kary B Mullis 在 1983 年開發 出聚合脢連鎖反應 T （polymerase chain reaction, PCR ）讓，極微量的 DNA可 以在 2 小時內 大量複製 幾十億倍 ，才大幅減 少DNA 複製所 需耗費的時間 ，此技術 對後 期基因 、分子生 r 物學的研究進展有劃時代的貢獻 ，因 此在 1993 年榮獲諾貝爾化 學獎的 殊榮。 e 聚合酶 鏈鎖反應(PCR)是 一個簡便 而有效的 方法,它可使 DNA在微量試管中 v w i 6 t 擴增至10 X 以上。這個 方法的原理十分簡單 在, 要擴增的 DNA 片段 兩端分別設 r . 計 一個前置引 子(forward primer)和反置引 子(reverse primer)使之與已變性的單股 m o 目標 DNA 緩冷配 對(annealing)後利, 用 DNA 聚合酶 (DNA polymerase) 以目標 Dc . DNA的 兩股 分別做為模板(template)來合 成新的 DNA股 。像這樣經由 (1)變性反 n o 應(denaturation),使 DNA的 兩股 分離。(2)緩冷配 對反應(annealing)