糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达的研究 目 的 l勺 TOLL样受体(Toll．1ike receptors，TLRs)是新近发现且备受关注的一种细胞 ．J recognition 跨膜受体及病原识别受体(pattern receptors，PRR)，在天然免疫中通过 molecular 对病原体相关的分子模式(pathogen．associatedpattems，PAMP)的识 别发挥作用，是天然免疫和获得性免疫的桥梁。近期TLRs信号传导途径在糖尿病 及其并发症的发生发展中所起的作用成为研究的热点。实验证实糖尿病患者单核 细胞中TLR2，TLR4的表达增加，肺泡巨噬细胞在清除I吸入性抗原及致病微生物 方面等都具有重要的作用，故本实验以肺泡巨噬细胞为研究对象观察TLR4在正常 大鼠及糖尿病4周，8周大鼠肺泡巨噬细胞表达的变化，探讨糖尿病机体免疫防御 能力变化的发生机制。 材料与方法 1、动物模型制备及分组 国医科大学实验动物室。随机分为3组：正常对照组(A组，n=8)，糖尿病4周组 (B组，n=8)，糖尿病8周组(C组，n=8)。糖尿病组一次性腹腔注射链脲佐菌素 一 60mg／kg体重，对照组注射同等剂量枸橼酸．枸橼酸钠缓冲溶液，724时后随机血 陟 糖≥16．67mmol／L为复制糖尿病模型成功。 ～ ‘． 2、肺泡巨噬细胞的获取与培养 BALF离心后沉淀细胞加入含10％小牛血清、lO力．单位／L青霉素、10万单位 ／L链霉素的RPMll640培养液，放入事先放有盖玻片的60mm培养皿中，充分混 匀后在37C，5％C02，饱和湿度的培养箱内孵育2小时，使臣ii铀tl胞贴难，弃去 非贴壁细胞。 3、免疫细胞化学染色观察TLR4在各组人鼠肺泡巨噬细胞农达的 变化 将贴有巨噬细胞的盖玻片用4％多聚甲醛固定30分钟，PBS洗片后采用免疫 系统测定阳性细胞单位面积平均光密度值。 4、统计分析 f孓 数据采用SPSSl3．0统计软件处理，实验数据用i±S表示，各组间指标比较 用单因素方差分析，PO．05为差异有统计学意义。 实验结果 免疫细胞化学染色结果 J下常组大鼠肺泡巨噬细胞可见弱的TLR4表达，以胞浆及胞膜为主呈较淡的 棕黄色改变；糖尿病4周组细胞TLR4在上述部位的表达增多，在胞浆及胞膜呈 金黄色改变；糖尿病8周组细胞的胞浆及胞膜呈深棕黄色改变，部分细胞胞核形 态不规则。 分析结果 糖尿病4周组TLR4表达较正常组明显增加，差异显著(尸O．05)；糖尿病 8周组TLR4表达较糖尿病4周组增加更为显著(PO．05)。 结 论 l、糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达较正常大鼠明显增高。 2、随糖尿病病程进展，TLR4表达增强，推钡JJTLR4在糖尿病大鼠肺泡巨噬细 胞的免疫防御反应中发挥着重要作用。 关键词 T