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中文摘要 实时定量PCR检测NF．KB在急性髓系白血病中的表达 中文摘要 背景与目的 核转录因子．KB(Nuclear B，NF．KB)是一种几乎表达于所有细 factor-kappa 胞的蛋白复合体【l】。Sen等1986年首次在成熟B细胞，浆细胞中发现的能与免 疫球蛋白K轻链增强子B点特异结合的核蛋白，并能促进K基因表达的核蛋白 B1(PS0)， 因子。NF．KB几乎存在于所有的细胞中。NF．KB家族包括NF．K NF—K KB 基酸组成的高度保守的Rel同源结构域，该区为与DNA结合、二聚体化、I 相互作用及核定位信号区域。 K 在胞浆中NF—KB与一种抑制性蛋白IB结合处于失活状态，能被激活剂 如TNF，生长因子，氧化剂，病毒，药物等激活。被激活的KB与NF．KB抑制 K B 蛋白(IB)解离，转入核内与靶基因的KB序列结合，增强其表达。NF．K 是一类功能广泛的核转录调控元件，通过对靶基因的调控，参与机体的免疫， 炎症，肿瘤的发生，细胞周期调控及凋亡等多种生物学过程【2，3】。 研究显示NF．KB导致恶性肿瘤的发生是因为细胞因子或其受体基因转录 的激活，促进了非调节性淋巴细胞的生长或阻断凋亡。此外，NF．KB直接作用 于细胞周期或DNA复制也会导致恶性肿瘤的发生【4】。体外实验表明，抑制NF． KB能促进肿瘤细胞发生凋亡【5】。近年研究发现，在急性髓系白血病(AML)患 者存在持续活化或高活性的NF．KB，且AML患者NF．KB活性与其亚型有关【6，71。 B 应用定量PCR方法检测AML患者NF．KmRNA表达情况，国内未见报道。 B 本实验通过实时定量PCR的方法比较正常人及AML患者NF．KmRNA表达 水平差异，探索其在AML发病中可能的作用机制。 中文摘要 对象与方法 1研究对象：60例病例来自2008年9月．2010年3月我院住院或门诊初诊急 性髓系白血病患者，男性28例，女性32例，平均年龄38(16．76)岁，其中 2实验方法 2．1RNA的提取与反转录：Trizol一步法提取总RNA，检测其完整性和浓度， FirstStrandeDNA 反转录反应使用Fermentas公司RevertAidTM Kit，反 Synthesis 应液配制按试剂盒要求操作，反应条件：42℃60min，70℃5min，4C5min，一20 ℃保存备用。 u u 2．2一致性检测：PCR反应体系：PCR反应液12．5l，eDNA模板31， 上下游引物各0．25ul，灭菌超纯水9u1，PCR反应总体积为25u1，反应条件 为：94℃预变性3min，94℃变性1min，57℃退火45sec，72℃延伸1min的 条件下循环35次，72℃延伸5 CAGGGCATA TAKARA设计合成NF．KB基因引物。上游引物序列为5’CTGAAC CCT AAGTCCATGTCCGCA GT3’，下游引物序列为5’G