中学植物细胞工程实验研究.ppt

接种注意事项 1.接种前75%酒精或0.1%新洁尔灭擦手 2.接种时尽量不要说话(防交叉污染) 3.不要在课室来回走动 4.接种工具要勤在火焰上烧； 5.接种工具在消毒冷却后才能使用； 6.接种工具不能直接放在超净工作台上，应倒立放在工具架上； 7.接种工具若不小心碰到带菌的物品，必须重新消毒后才能使用。 8.不要用手直接接触无菌的物品。 ?　植物细胞工程实验－以烟草叶片的离体再生系统建立为例　　　　　　　　　　　　黄胜琴 一、实验目的  了解植物离体培养（组织培养）的技术方法。 二、原理 细胞全能性: 每个植物细胞都具有该植物的全部遗传信息，在合适的培养条件下都有发育成完整植株的潜在能力。 植物组织培养: 在无菌条件下将离体的植物器官、组织、细胞或原生质体培养在人工配制的培养基上，人为控制培养条件，使其生长、分化、增殖发育成完整植株或生产次生代谢物质的过程和技术，也叫离体培养。 三、材料与实验用品 1、材料：烟草叶片 2、用品：灭菌锅、电炉、试剂瓶、容量瓶、烧杯、玻棒、移液管、量筒、精密天平、酒精灯、镊子、解剖刀、果酱瓶、牛皮纸 . 3、试剂：ＭＳ培养基、蔗糖、琼脂、NaClO、 70%酒精、1mol/L HCl、1mol/L NaOH、NAA、6－BA 、. 四、方法步骤 1．配制培养基:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖３％+琼脂0.7％ NAA母液:先用95%乙醇溶解后，再用热水定容。 6-BA母液:先用1 mol/L NaOH 溶解后，再加水定容。 2.准备好接种工具、吸水纸、牛皮纸（报纸包好）、滤菌器、空果酱瓶、无菌水（每组各1） 3.灭菌：121℃，15-20min 4.趁热（65℃）在超净工作台上加入已滤菌的0.1％NaClO（无菌状态）于培养基中。 5.接种: 选取外植体 自来水冲洗 75%酒精浸泡30s １０％ＮaClO 浸泡6min 无菌水冲洗4-5次 无菌吸水纸吸干 分割成边长为0.8~1cm的正方形 火焰上方接种 盖紧瓶盖 培养 贴标签 整理桌面 第10天 第20天