国外全自动沙眼衣原体及淋球菌核酸双检技术新进展..doc

国外全自动沙眼衣原体及淋球菌核酸双检技术新进展 沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，CT）和淋球菌(Neisseria gonorrhoeae, NG）是全球最主要的性传播疾病的病原体。美国CDC推荐16-25岁的年轻女性每年进行CT的筛查。我国从2008年已经开始对CT感染进行单独报病，而NG是我国法定上报的传染病。CT和NG的共感染现象非常普遍，因此研发的诊断技术平台也通常是检测两种病原体。 最先发展起来的CT和NG核酸检测技术是直接检测核酸技术（NAH）：包括Gen-probe公司的PACE2、PACE 2C和Digene 公司的杂交捕获HC2，但是NAH的方法其敏感性远不如核酸扩增技术。随着核酸扩增技术的出现，这类方法逐步被取替而失去其应用价值。截止目前为止，美国FDA 批准共五家公司的商品化试剂用于检测泌尿生殖道的CT和NG感染检测，分别是罗氏的Amplicor CT/NG 、Cobas 4800，雅培公司的Real Time CT/NG，Gen-probe的APTIMA Combo2（AC2），Becton Dikinson（BD）公司的Probe Tec ET CT/GC、Probe Tec ET CTQx/GCQx 和Cepheid 公司的GeneXpert CT/NG。 罗氏公司Amplicor CT/NG 产品用于检测CT的靶目标基因位于CT隐蔽的质粒基因上，而用于检测NG的靶目标基因则是DNA胞嘧啶甲基转移酶基因，扩增后的产物检测则基于生物素-亲和素的交互作用利用ELISA的方法进行。该方法由于不能够检测出瑞典瑞典的CT新变种，现在该公司已出新的产品——Cobas 4800 CT/NG以取代该产品。Cobas 4800 CT/NG检测试剂盒在全自动的平台基础上完成实时定量PCR的检测全部步骤。该试剂利用两个靶基因检测CT，一个位于隐蔽质粒上，另外一个靶基因位于编码主要外膜蛋白的ompA，可以保证能够检测瑞典的CT新变种2。而用于检测NG的靶基因则分别位于正向重复序列9（DR9）及其DR9突变区上。该产品通过全自动化的处理，可有效的预防实验过程中的人为污染，可在8小时内完成高达278份的样本量。目前该产品可应用于阴道拭子，宫颈拭子、尿液等标本。而该产品应用于液基细胞学还在评估当中。研究者利用已上市的Gen-probe的AC2和Becton Dikinson公司的Probetec ET CTQx/GCQx的产品作为参评试剂，多中心评价Roche的Cobas 4800 CT/NG产品的性能，以患者的患病状态作为诊断的标准，该产品的敏感性和特异性的结果见表一。 图一：罗氏的Cobas 4800检测系统 表一：罗氏的Cobas 4800检测CT和NG的临床特性 样本量 样本类型 敏感性 对照试剂 特异性 对照试剂 参考文献 C4800 AC2 CTQ C4800 AC2 GCQ CT 4316 宫颈拭子 91.6 96.6 95.1 99.8 99.2 99.7 1 4316 女性尿液 92.3 95.8 94.8 99.8 99.5 99.8 1 4248 阴道拭子 92.9 ND ND 99.7 ND ND 2 768 男性尿液 97.6 96.8 98.4 99.5 98.9 99.2 3 NG 4316 宫颈拭子 95.6 100 94.3 100 100 99.8 1 4316 女性尿液 98.5 96.9 97 97 99.9 99.9 1 4248 阴道拭子 98.5 ND ND 100 ND ND 2 768 男性尿液 100 100 100 99.7 100 99.7 3 C4800, 罗氏的Cobas 4800；AC2，Gen-probe的APTIMA Combo2；CTQ，GCQ，为BD公司的Probetec ET CTQx/GCQx；ND，文献中没有提及该数据。 雅培公司Real Time CT/NG产品依赖于m2000全自动系统。该产品目前也包含了CT的两个靶基因，其中一个位于隐蔽质粒上，另一对引物同样是为了保证能够检测瑞典的CT新变种而选用的ompA基因的一段保守序列；而用于检测NG的引物位于Opa基因上。该产品所用对照是在DNA提取步骤中加入的，可以用以评价提取的效率和潜在的PCR抑制。该系统可以在8小时内一次处理96个样品，检测186个样品。Gaydos CA 等通过多中心的临床试验评估了雅培公司的Real Time CT/NG产品，研究中共采集16个地区共3832例患者的标本，选用已上市的Gen-probe的AC2和Becton Dikinson公司的Probetec ET CT/GC的产品作为参评试剂，以患者的患病状态作为诊断