金银花nrDNA ITS 区聚合酶链反应条件的研究 - 《中国药科大学学报》！.PDFVIP

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2017-06-21 发布于天津
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金银花nrDNA ITS 区聚合酶链反应条件的研究 - 《中国药科大学学报》！.PDF

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金银花nrDNA ITS 区聚合酶链反应条件的研究 - 《中国药科大学学报》！

学报 Journal of Ch na Pharmaceut cal Un vers ty 　2004, 35(4 ):303 ～306 303 nrDNA ITS 王冲之, 李　娟, 李　萍 (, 210038) 【　】　:金银花nrDNA ITS 区序列G+C 含量为68%, 用常规的PCR 方法扩增效果差。本研究通过改变扩增程序及使用改性的方法显著提高了金银花nrDNA ITS 区的扩增效率。 :分别从金银花叶及药材中提取总DNA, 通过优化扩增条件, 对nrDNA ITS 区进行扩增, 并比较了两种优化方法的差别及适应性。方法1:提高变性温度至97 ℃;方法2:添加混合改性 (DMSO 4%-甘油10%)。:与方法1 相比, 方法2 可降低变性温度5 ℃, 升高退火温度9 ℃, 降低镁离子浓度至0.5 mmol/L, 降低 Taq DNA 聚合酶用量至0.1 U(30 μl 体系), PCR 产物量显著提高, 且可消除植物DNA 粗提物中杂质的干扰。 :通过提高退火温度及添加改性可克服高G+C 含量金银花nrDNA ITS 区序列扩增的困难, 该方法的建立有助于解决植物来源DNA 模板的PCR 扩增问题。【】　金银花;nrDNA ITS 区;高G+C 含量;PCR 扩增;反应条件优化【】　R917 　　【】　A 　　【】　1000-5048(2004 )04-0303-04 　　Capr fol aceae PCR 。 nrDNA Lonicera japonica Thunb. ITS PCR , , 。(2000 ) 、PCR 。 Lonicera hypoglau- DNA ca M q.、Lonicera confusa DC. 。 Lonicera dasystyla Rehd.。 1 　　 (L.japonica Thunb.) [1-3] , 。 1.1　样　品 nrDNA ITS , , ; 、。 , 2002 , DNA 5 。。。。 , DNA (nrDNA )18S-5.8S-26S 1.2 　仪　器 [4] , , Mastercycler grad ent PCR , 5417R nrDNA (ITS ) , Thermom xer comfort (Ep- [5, 6] 。, pendorf);Gel Doc2000 (B o-Rad ); [7] [8] nrDNA ITS , Ecp3000 ()。。 1.3 　试　 , Tr s (Oxo d );SDS (S gma);CTAB, PVP, nrDN