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少棘蜈蚣钾通道毒素多肽KTX-Ssm175的表达、纯化与鉴定-自然科学版
第 35卷第4期 中南 民族大学学报(自然科学版) V0I_35NO．4 2016年 12月 JournalofSouth—CentralUniversityforNationalities(Nat．Sci．Edition) DeC．2016 少棘蜈蚣钾通道毒素多肽 KTX—Ssm175的表达、纯化与鉴定 尹世金 ，陈 璇 ，闻闫瀚 ，陆春兰 ，胡青兰 ， 邹 艳 ，张 丰 ，王 冠 ，黄 鑫 ，黄 谨 (1中南民族大学 药学院，武汉430074；2中南民族大学 生物医学工程学院，武汉430074) 摘 要 采用IlluminaII代转录组测序技术构建了湖北少棘蜈蚣毒腺转录组数据库，从 中筛选到一个全新的毒素 多肽编码基因KTX-Ssm175．经序列比对显示 KTX．Ssm175多肽与 K．SLPTX—Ssmla高度同源，提示 KTX-Ssm175多肽 为一种新的电压门控性钾通道阻断剂．采用基因工程技术构建了pGEX-4T一1-KTX—Ssm175原核表达载体，通过GST 融合蛋白表达法对 KTX．Ssm175多肽在大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达和分离纯化．MALDI-TOF—MS质谱测定显 示纯化的KTX—Ssm175多肽分子量与理论值相吻合，说明成功实现了KTX—Ssm175多肽的基因工程制备，为深入研 究其结构与功能提供了物质基础． 关键词 少棘蜈蚣 ；转录组；KTX—Ssm175；钾通道阻断剂；基因工程 中图分类号 Q812 文献标识码 A 文章编号 1672-4321(2016)04-0043-05 Expression．PurificationandIdentification ofPotassium Channel ToxinsKTX．Ssm175from Scoropendrasubspinipesmutilans YinSh~in，ChenXuan，WenYanhan，LuChunlan，HuQinglan，ZouYan， Zhang ，WangGuan ，Huang ng ，HuangJin (1CollegeofPharmacy，South·CentralUniversityforNationalities，Wuhan430074，China； 2CollegeofBiomedicalEngineering，South—CentralUniversityforNationalities，Wuhan430074，China) Abstract Anew toxinpolypeptidegeneofKTX-Ssm175wasscreenedbyconstructingthevenomoustranserlptomedatabase ofScolopendra subspinipesmutilansfrom HubeiProvince，using Illumina second generation transcriptome sequencing technology．SequencealignmentshowedthatthepolypeptideofKTX—Ssm175washighlyhomologousto K—SLPTX—Ssmla， suggestingKTX—Ssm175polypeptidemightbeanovelvoltage—gatedpotassium channelblocker．A pmkaryoticexpression vectorpGEX_4T一1一KTX-Ssm175wasconstructedbygeneticengineeringandKTX—Ssm175polypeptideswereexpressedand purifiedinE．coliRosettabyGSTfusionproteinexpression．
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