多重PCR快速检测食品中的单核细胞增生性李斯特菌-中国农业科学.PDFVIP

中国农业科学 2010,43(23):4893-4900 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.23.015 多重PCR快速检测食品中的单核细胞增生性李斯特菌 1 1 1 2 1 1 刘海泉 ，赵 强 ，孙晓红 ，吴启华 ，潘迎捷 ，赵 勇 1 2 （上海海洋大学食品学院，中国上海 201306 ； 美国缅因大学食品科学与人类营养系，美国缅因州 04469-5735 ） 摘要：【目的】通过对检测食源性致病菌单核细胞增生性李斯特氏菌(LM)的多重 PCR 体系的优化，建立一种 能够在食品样品中应用的四重PCR。【方法】采用热裂解提取菌液和菌落DNA，以 16S rRNA、inlAB、iap、hly 基 因为靶基因设计引物，从影响多重PCR扩增的引物浓度、退火温度进行优化。【结果】通过其它5 种同属异种菌即 英诺克李斯特氏菌、西尔李斯特氏菌、威尔西李斯特氏菌、绵羊李斯特氏菌、格氏李斯特氏菌及副溶血性弧菌均 未扩增出特异性的片段。纯培养物的最低检测限为102 CFU/mL，模拟污染的生猪肉检测限不大于0.4 CFU/g。【结 论】通过菌落获得DNA的多重PCR方法更好，该方法具有敏感、特异、快速及准确的优点，可用于食品中LM的快 速检测。 关键词：单核细胞增生性李斯特氏菌；多重聚合酶链式反应（PCR）；检测；菌落 Rapid Detection of Listeria monocytogenes in Food by Multiple PCR 1 1 1 2 1 1 LIU Hai-quan , ZHAO Qiang , SUN Xiao-hong , Vivian C.H. WU , PAN Ying-jie , ZHAO Yong 1 2 ( College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China; Department of Food Science and Human Nutrition, The University of Maine, 5735 Hitchner Hall, Orono, ME 04469-5735, USA) Abstract: 【Objective 】 A multiple polymerase chain reaction (PCR) system was developed to detect Listeria monocytogenes (LM)，the more important food born pathogens, and applied to detect LM from food samples. 【Method 】 Template DNA was obtained by thermolysis broth cultured bacteria and thermolysis colony. Primers were designed according to the 16S rRNA, inlAB, iap, hly genes. The concentration of primers and annealing temperature were examined and optimized. 【Resu