上课用叶绿素测定.pptVIP

实验五  不同生长环境下植物叶绿素a、b含量的测定 一、实验目的、原理 [实验目的] 在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a和b的方法及其计算。 [实验原理] 如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽然有明显的差异，但吸收曲线彼此有重叠，在这种情况下要分别测定两个组分，可根据朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对光密度的影响，最后分别得到两种组分的含量。 根据叶绿素a和b的吸收光谱曲线，叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b的最大吸收峰在645nm, 吸收曲线彼此又有重叠。 1 实验仪器 分光光度计，离心机，天平，剪刀，研钵，漏斗，移液管等。 2 实验试剂 丙酮，碳酸钙，石英砂。 3 实验材料 校园内不同生境阴生、阳生的光萼小蜡及红花檵木叶片。 三、实验步骤 称取新鲜叶片0.5g→加纯丙酮5ml研磨成匀浆→再加80%丙酮5ml，并转入离心管→充分洗涤研钵→离心（3000转/分，10min）→取上清液→定容至20 ml→暗处静置5min →取上述提取液1ml，加80%丙酮4ml稀释后（5倍）转入比色杯中，以80%丙酮为对照，测定OD值→计算各种浓度（Ca 、Cb）。 四、实验结果计算 将测定得到的吸光值代入下面的式子： Ca=12.71A663－2.69A645 Cb=22.9A645－4.68A663 Cr=8.02 A645+20.21 A663 （Ca、Cb：mg/L） 叶绿素的含量（mg/g）= [叶绿素的浓度×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重 1 由于植物叶子中含有水分，故先用纯丙酮进行提取，以使色素提取液中丙酮的最终浓度近似80%。 2 由于叶绿素a、叶绿素b的吸收峰很陡，仪器波长稍有偏差，就会使结果产生很大的误差。 研磨材料时动作快，提取液置暗处。 六、实验作业 1、根据实验结果计算出该种植物的叶绿素a、b的比值。 2、根据实验结果，计算出该植物每克鲜重叶片中叶绿素的含量（单位用mg·g-1FW表示），并比较阴生、阳生之间的区别。 实验六植物光合作用强度和呼吸作用强度的测定 根据光合作用的公式：CO2+H2O→CH2O+O2，测定植物的光合速率有下列三类方法： 　　（1） 测定干物质的积累，常用的方法有半叶法、改良半叶法。 　　（2）测定O2的释放，常用的方法有氧电极法。 　　（3）?测定CO2吸收的气流法，即利用红外气体分析仪测定光合速率。 在这三种方法中，方法（1）过于粗糙，误差轻大而可靠性差，且过于耗时，仅可用于验证性实验；方法（2）通过测定液体中的含氧量的连续变化来测定光合速率，可在液体中加入各种试剂来测定其对氧释放的影响，并可用于研究藻类植物的光合速率，具有较高的灵敏度，适应于实验室中使用；方法（3）通过直接测定活体叶片的CO2交换，可以迅速准确地测出光合速率，近年来便携式光合作用系统的出现，使之可以广泛地用于田间和实验室。同时通过内置或外接计算机改变叶室的光强、CO2浓度、湿度，还可以非常迅速方便地测定植物的CO2补偿点、CO2饱和点、光补偿点、光饱和点、植物的羧化效率、表观光合量子效率、蒸腾速率等指标。在研究逆境生理、生态生理中得到了广泛地利用。 实验七 种子活力的快速测定氯化三苯基四氮唑(TTC)法及红墨水法 一、实验目的、原理 [实验目的] 熟悉氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定种子活力的方法及其计算。 【实验原理】 凡有生活力的种胚在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶(NADH2或NADPH2)还原时，可产生红色的三苯基甲月替(TTＦ)，胚便染成红色。当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。 二、材料、仪器设备及试剂 1 仪器 培养皿2套；镊子1把；单面刀片1片；垫板(切种子用)1块；烧杯1个。 2 试剂 TTC溶液的配制：取5g TTC溶于1L蒸馏水中，配制成0.5％的TTC溶液。药液PH应在6.5～7.5。 三、实验步骤 1将玉米种子，用温水(30℃)浸泡2～6H，使种子充分吸胀，增强种胚的呼吸作用 。 2随机取种子50粒，沿种胚中央准确切开，将每粒种子分别放在二个培养皿中。 3一份加TTC溶液，以浸没种子为度。 4 将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样TTC染色处理，作为对照观察。 4两份都放入30～35℃的恒温箱内保温30Min。 5保温后，倾出药液（回收），用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力。 四、注意事项 1．TTC溶液应贮于棕色瓶中