大豆翻译起始因子E干扰片段克隆及其RNAi载体构建.pdfVIP

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2017-06-18 发布于福建
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大豆翻译起始因子E干扰片段克隆及其RNAi载体构建.pdf

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大豆翻译起始因子E干扰片段克隆及其RNAi载体构建

华北农学报 ·2 0 1 4 ，2 9 ( 4 ) : 1 -6 4E 大豆翻译起始因子干扰片段克隆及其ＲNAi 载体构建，，，，，，高乐翟锐丁雪妮李凯章红运王涛智海剑 ( ，，， 210095) 作物遗传与种质创新国家重点实验室南京农业大学国家大豆改良中心农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室江苏南京 : ＲNA (ＲNA interference ，ＲNAi) ，，摘要应用基于干扰原理的大豆转基因技术能够在转录水平沉默同源靶基因这。 VPg 10 eIF4E 为转基因抗病毒作物的培育提供了新的策略通过比对已报道的能与病毒发生互作的种植物的氨基， eIF4E 62 ～ 237 ， 406 bp eIF4Ei ( 58 bp 酸序列确定出大豆的保守区间为位氨基酸序列克隆出的干扰片段含特异性重组序列attB)， GATEWAY pB7GWIWG2 ( )-eIF4Ei 。进而采用技术构建了干扰表达载体 Ⅱ 之后通过测序证实干扰片 eIF4Ei ; 2 ccdB eIF4Ei ; 段在载体构建过程中没有发生变异酶切试验证实终端质粒的个位点均被置换用启动子和终 PCＲ， 2 。止子设计的引物对含有重组质粒的菌液进行扩增证实个干扰片段以相反的方向插入到终端质粒中从而证，ＲNAi 明反向重复的干扰表达载体构建成功为应用基于原理的大豆转基因技术培育对大豆花叶病毒具有抗性的大豆新种质提供了基础材料。 : ;eIF4E ;ＲNA ;GATEWAY ; 关键词大豆花叶病毒基因干扰技术载体构建中图分类号:S565． 1 文献标识码:A 文章编号:1000 － 7091 (2014)04 － 0001 － 06 Cloning of Interference Fragment of Eukaryotic Translation Initiation Fact