生物化学工程实验教学中心.PDF

生物化学工程实验教学中心 编 汇 义 讲 验 实 业 专 程 工 物 生 二 00 七 年 七 月 总 目 录 《生物反应工程实验》实验讲义 《生物工程专业实验》实验讲义 《生物化学实验》实验讲义 《微生物学实验》实验讲义 《仪器分析实验》实验教学讲义 《药物分析实验》实验讲义 《分子生物学实验技术》实验讲义 《免疫学》实验讲义 《生物反应工程实验》实验讲义 制药与生命科学学院生物工程专业 编者： 韦 萍 曹飞 二 00 五 年 六 月 目 录 实验一 游离酶与固定化酶酶学性质比较 1 实验二 用亚硫酸钠氧化法测定气液接触过程 5 实验三 微生物反应器的反应性能试验 8 实验四 停留时间分布的测定 11 实验一 游离酶与固定化酶酶学性质比较 实验目的： 掌握测定酶动力学参数的实验方法，作图法计算酶动力学参数，掌握固定化酶的方法， 以及固定化酶后动力学参数的变化。 实验原理： 要建立一个完整的酶动力学方程，必须要通过动力学实验确定其动力学参数。对 M—M 方程，就是要确定 rmax 和 Km 值。但直接应用 M—M 方程求取动力学参数所遇到的主要困难 在于该方程为一非线性方程。为此常将该方程加以线性化，通过作图法直接求取动力学参数。 通常有下述几种作图方法。 Lineweaver—Burk 法(简称 L-B 法) 。将M—M 方程取其倒数得到下式： 1 1 K 1 + m (1) r r C s max r s max 以 1 ／r 对 1 ／C 作图可得一直线，该直线斜率为 K ／r ，直线与纵轴交于 1 ／r ， s s m max max 与横轴交于一 1 ／Km 。此法又称双倒数图解法。 Hanes—Woo1f 法(简称 H—W 法) 。将式(1)两边均乘以 Cs 得到 C K C s m + s (2) r r r s max max 以C ／r 对 C 作图，得一斜率为 1 ／r 的直线，直线与纵轴