畜禽肉中己烯雌酚的测定.PDFVIP

畜禽肉中己烯雌酚的测定 食品安全检验手册129页 1. 原理 试样匀浆后，经甲醇提取过滤，注入HPLC柱中，经紫外检测器鉴定。于波长230nm处测 定吸光度，同条件下绘制工作曲线，己烯雌酚含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，试 样与工作曲线比较定量。 2. 试剂 (1) 甲醇 (2) 0.01mol/L磷酸二氢钠（NaH PO .2H O ）取1 g 磷酸二氢钠溶于水成 500 mL 。 2 4 2 (3) 磷酸 (4) 己烯雌酚（DES ）标准溶液：精密称取100 mg 己烯雌酚（DES ）溶于甲醇，移入100mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES 1.0 mg ，贮于冰箱中。 (5) 己烯雌酚（DES ）标准使用液：吸取10.00 mL DES贮备液，移入100mL容量瓶中，加甲 醇至刻度，混匀，每毫升含DES 100μg 。 3. 仪器 (1) 高效液相色谱仪：具紫外检测器。 (2) 小型绞肉机。 (3) 小型粉碎机。 (4) 离心机 4. 分析步骤 (1) 提取及净化 称取5 g （±0.1g ）绞碎（小于5mm ）肉试样，放入50mL具塞离心管中，加10.0mL甲醇，充 分搅拌，振荡20min ，于3000r/min离心10min，将上清液移出，残渣中再加10.0mL甲醇，混 匀后振荡20min ，于3000r/min离心10min，合并上清液，此时若出现混浊，需再离心10min， 取上清液过0.5μmFH滤膜，备用。 (2)色谱条件 ①色谱柱：Grace Smart C18 （5µm ）4.6mm × 250mm 。 ② 流动相：甲醇+0.01mol/L磷酸二氢钠（70+30 ），用磷酸调pH = 5 （其中NaH PO .2H O 2 4 2 水溶液需0.45μm滤膜）。 ③流速：1mL/min。 ④进样量：20μL 。 ⑤柱温：室温 ⑥紫外检测器：检测波长230nm 。 (3) 标准曲线绘制 称取5份（每份5.0g ）绞碎的肉试样，放入50mL具塞离心管中，分别加 入不同浓度的标准液（6.0，12.0，18.0，24.0μg/mL ）各1.0mL，同时做空白。其中甲醇总量 20.00mL ，使其测定浓度为0.00，0.30，0.60，0.90，1.20μg/mL ，按4(1)处理方法提取备用。 (4) 测定 分别取样20μL ，注入HPLC柱中，可测得不同浓度DES标准溶液峰高，以DES浓度对峰高绘 制工作曲线，同时取样液20μL ，注入HPLC柱中，测得的峰高从工作曲线图中查相应含量。 5. 计算 按下式计算： ρ×∨ X （1-82） m 式中： X——试样中己烯雌酚含量，mg/kg ； Ρ——被测液中己烯雌酚含量,μg/mL，； m——试样的质量，g ； V——试样甲醇提取液总体积， mL 。 6. 色谱图见图1-98 图 1-98 己烯雌酚色谱图