外源化合物对细胞代谢的影响.docVIP

外来化合物对细胞生理代谢的影响——急性Zncl2染毒对小麦幼苗SOD活力影响 专业： 学号 姓名： 指导老师： 摘要：本实验以急性Zncl2和小麦幼苗为实验材料，研究了不同浓度(Zncl2100mg/mL、200mg/mL、400mg/mL、800mg/mL、1600mg/mL)对小麦幼苗生理活性的影响,初步阐明了Zn2+对小麦幼苗的毒害机理。结果表明,在Zn2+胁迫下,随处理浓度的升高,小麦幼苗叶片中超氧阴离子自由基(O·2-)含量、丙二醛(MDA)含量、可溶性糖含量、抗坏血酸过氧化物酶(APX)及过氧化物酶(POD)活性均呈上升趋势,超氧化物歧化酶(SOD)活性呈先下降后上升的趋势;抗坏血酸(ASA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性均呈现先上升后下降的趋势,可溶性蛋白和叶绿素含量呈下降趋势。对SOD、POD、CAT同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果分析表明,正常情况下,小麦幼苗叶片主要表达Rf值(相对迁移率)分别为0.98、0.96、0.9、0.8、0.6、0.48的6条SOD同工酶带;POD同工酶带主要分为5区,至少包括10条同工酶酶带;CAT主要表达2条同工酶带。浓度小于120mg·L-1的Zn2+抑制SOD同工酶的表达,促进CAT同工酶的表达,浓度大于240mg·L-1的Zn2+促进SOD同工酶的表达,抑制CAT同工酶的表达, Zncl2诱导小麦幼苗。 关键词：外来化合物 细胞生理代谢 影响 急性Zncl2染毒 小麦幼苗 SOD活力 前言：采用多组不同浓度Zncl2处理小麦幼苗，利用对照比较的方法,研究急性Zncl2染毒对小麦幼苗超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响。实验结果表明不同浓度的Zncl2染毒对小麦幼苗SOD活力影响程度不同，不同时间的浸泡对小麦幼苗SOD活力影响也不同。超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,简称SOD)是广泛存在于生物体内的一种金属酶,因其能够催化以下反应而得名:O2- + O2- + 2H+ → H2O2 + O2 ,因此SOD是清除人体内O2-自由基的最佳催化剂之一。医学研究表明,人体内的O2-自由基如得不到及时清除,能引起衰老、自身免疫能力下降及产生一系列病变。 SOD 具有抗衰老、抗肿瘤、抗辐射、增强人体免疫的功能,被誉为人体内垃圾的清道夫.近年来,利用SOD的清除O2-自由基功能人们相继开发了一系列富SOD的制品,如SOD系列化妆品、SOD 啤酒、饮料和其他SOD食品。SOD已成为众多制药厂、日化厂和食品加工厂的重要原料。由于从动植物体内提取 SOD 的现行工艺复杂,加上动植物体内SOD的含量很低,因而近年来在国际国内市场上SOD的价格上升,呈现供不应求的趋势。酶作用需要有适合的条件。在适宜的条件下，酶的催化能力最强，表现出的活性最大， 否则，催化能力减弱，活性降低， 甚至没有活性。因此，探索影响酶活性的因素就显得尤为重要。但是由于体内SOD的活力受到多种外来化合物的影响，如各种不同的物理、化学、生物等不同因素的影响，因此研究外来化合物对SOD活力的影响显得尤为重要，具有较大的现实意义。本实验重点进行比较研究急性Zncl2染毒对小麦幼苗超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响，实验设计了100mg/mL、200mg/mL、400mg/mL、800mg/mL、1600mg/mL四种不同浓度的Zncl2，以及0mg/mL的空白对照组，每一浓度又设置了一个对照管和四个实验管。每个实验组及每一实验组中的各个试验管均进行除了所设置对比外其他实验处理均相同的操作。 实验材料与方法 实验材料 小麦幼苗 0.05mol/L PBS缓冲液 SOD试剂盒 冰醋酸 5个不同浓度Zncl2溶液（100mg/L ,200mg/L,400mg/L,800mg/L,1600mg/L) 实验仪器 离心机 分光光度计 天平 恒温水浴锅 冰浴 微量移液器（50μL,100μL） 研钵 离心管 一次性塑料管 试验方法 3.1 Zncl2染毒处理实验及粗酶提取液的制备 播种5～6h,萌发24～36h后将露白的种子随机摆放于培养皿中，30～40粒/皿左右，生长7天后，分别用不同浓度的Zncl2溶液处理8天后，取茎叶0.2～0.3g,按1:20加入预冷的PBS液（1/3用于研磨，2/3用于清洗，小范围研磨，便于冲洗）冰浴研磨，并用剩余的PBS液冲洗入离心管，8000rpm离心15min,上清液即为5%的粗酶提取液，用于SOD酶活性的测定。 3.2总SOD酶活测定 总SOD酶活测定按表进行 试剂 测定管（4个） 对照管 SOD试剂1 1ml 1ml 粗酶提取液 40μL 蒸馏水 40μL SOD试剂2 100μL 100μL