第二章 低氧反应元件(HRE)调控下h-VEGF165基因表达与其蛋白产物的延迟消失.pdf

生理学报 Acta Physiologica Sinica, June 25, 2006, 58 (3): 281-286 281 研究论文 低氧反应元件调控下 h-VEGF165 基因表达及其蛋白产物的延迟 消失 1,* 1 1 2 张宜乾 ，张中明 ，闫英群 ，董红燕 1 2 徐州医学院附属医院胸心外科； 徐州医学院神经生物研究中心，徐州 221002 摘 要：血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)转基因可促进心肌缺血区血管生成，改善心脏功能， 然而长期高水平表达又会引起诸多副作用。为调控VEGF 表达，在启动子区加入低氧反应元件(hypoxic response element, HRE)作为调控开关，研究氧环境对VEGF 基因mRNA 及蛋白产物表达的影响。重组腺相关病毒(recombinant adeno-associ- ated virus, rAAV)作为载体(rAAV-HRE-h-VEGF165) ，转染离体培养大鼠心肌细胞，在常氧/ 缺氧(氧浓度1%)/ 缺氧复氧条件 下进行培养，用酶联免疫特异性测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法检测培养液h-VEGF165 蛋白浓度，细 胞免疫荧光染色观测细胞内h-VEGF165 蛋白表达，逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT- PCR)方法检测细胞h-VEGF165 mRNA 表达。结果显示：未转染组、常氧培养组均无h-VEGF165 mRNA 及其蛋白表达；缺 氧培养组h-VEGF165 mRNA 及蛋白均表达；缺氧复氧4 h 组的h-VEGF165 mRNA 消失，培养液中h-VEGF165 蛋白减少，细 胞内h-VEGF165 蛋白存在；缺氧复氧8 h 及12 h 组的h-VEGF165 mRNA 消失，培养液和细胞内h-VEGF165 蛋白均消失。研 究表明，在HRE 调控下，缺氧可促使h-VEGF 165 基因表达，复氧后，h-VEGF 165 mRNA 表达停止，蛋白产物延迟消失。 关键词：血管内皮生长因子；低氧反应元件；心肌细胞 中图分类号：R6 54 .2 Delayed disappearance of h-VEGF165 mRNA and protein under regulation of hypoxic response element 1,* 1 1 2 ZHANG Yi-Qian , ZHANG Zhong-Ming , YAN Ying-Qun , DONG Hong-Yan 1 2 Department of Cardiothoracic Surgery, Affiliated Hospital; Neurobiological Research Center, Xuzhou Medical College, Xuzhou 221002, China Abstract: Transfer of vascular endothelial growth factor (VEGF) gene to ischemic myocardium may provide a useful approach for angiogenesis and improve cardiac performance. However, uncontrolled expression of VEGF in vivo may result in certain side effects,