第二章 蛋白质纯化柱-ni.pdf

镍离子金属螯合亲和层析介质使用说明书 （完全版） 镍离子金属螯合亲和层析介质使用说明书 （完全版） 一、 简介 三、 适用范围 金属螯合亲和层析，又称固定金属离子亲和色 分离His融合蛋白及能被金属离子吸附的多肽、 谱，其纯化原理是利用蛋白质表面的组氨酸与多种 蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白。 2+ 2+ 2+ 2+ 3+ 过渡金属离子如Cu ，Zn ，Ni ，Co ，Fe 形成 四、 E.coli表达可溶性his重组蛋白纯化操作说明 配位相互作用，从而能够吸附富含这类氨基酸的蛋 1. 缓冲液配制 白质，从而达到分离纯化的目的。因此，固定有这 缓冲液A （平衡缓冲液）：10mM Na HPO ， 些金属离子的琼脂糖凝胶就能够选择性地纯化这 2 4 1.8mM KH PO ，140mM NaCl，2.7mM KCl ， 类含有多个组氨酸的蛋白以及多肽和核苷酸。半胱 2 4 用高浓度NaOHl调节pH值至8.0。 氨酸和色氨酸与固定金属离子结合力要远小于组 缓冲液B （洗脱缓冲液）：50mM NaH PO ， 氨酸残基，对纯化影响不大。 2 4 300mM NaCl，500mM imidazole （咪唑），用 纯泰特殊结构设计的镍离子金属螯合亲和层 高浓度NaOHl调节pH值至8.0。 析介质包括Ni-NTA和Ni-IDA 两种配体，既具有特 缓冲液C （咪唑浓度稀释液）：50mM NaH PO ， 异性好、螯合镍更稳定，镍离子脱落少，使用寿命 2 4 300mM NaCl，用高浓度NaOH调节pH值至8.0。 长的优势，同时具有基础层析介质颗粒粒度均匀， 注：如使用试剂盒，盒中提供10×缓冲液A 、1×缓冲 流速快的优点，并且物理和化学稳定性好，能耐受 液B和10×缓冲液C 的配制干粉。分别在缓冲液A和C 更高浓度的还原剂、变性剂和去垢剂，批次重复性 的盛装容器中加入双蒸水定容至100ml，得到缓冲 好，质量稳定。本产品已经螯合好镍离子，使用更 液A和C 的10倍浓缩液，使用时根据需要取一定量进 方便。 行10倍稀释，即得到上述正常使用浓度的两种溶 注：镍离子有六个螯合价位，Ni-NTA螯合了四价， 液。缓冲液B 的每包配制干粉可配制1 ×缓冲液B 剩余两价；而Ni