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附录B: 茶多糖的主要结构和配置 ZHOU Peng 1 , XIE Mingyong 1 , NIE Shaoping 1 WANG Xiaoru 2 中国教育部食品科学重点实验室，南昌大学。 中国教育部分析科学重点实验室，厦门大学。 摘 要 气相TEM，CD，X-射线衍射[5-7]和核磁共振。结果从这些技术获得的结果已开始解开多糖的三维结构。 主机的技术已被报道在涉及多糖的分析的文献中。酶法分析已经研究用于多糖的结构的重要方法其特异性和效力。当试剂阵列分析法（RAAM）与计算机技术相结合时进一步简化了酶分析方法的操作，它提供了能够产生重要的结构信息的强大的技术。GC[9-11]，LC[12,13]和CE已经用于单糖和其衍生物的分离，鉴定和纯度检查。GC-MS分析可以提供关于保留时间以及信息的M / Z，这在多糖或降解产物的甲基化衍生物用史密斯方法分析是有利的。HPLC-ESI-MS已经被应用到测量多糖的分子量。MALDI-MS能电离的生物分子不经进一步碎裂，导致分子电离用于分子量测定[14,15]。Garozzo等[16]。作出试图合并的MALDI-MS和大小排阻层析。核磁共振已被用来阐明的糖苷键的性质，并重复单糖单元中的多糖序列的数目。二维核磁共振可以用来鉴定多糖的纯度。该数据可以由计算机软件程序CASPER进行分析（计算机辅助频谱评价普通），它可以被设置成产生多糖的模拟结构[17,18]。电泳不仅用于纯度和结构分析，也用于定量测定的酶促降解产物。可以通过分析PAGEFS电泳技术，可还原羟基被衍生有荧光部分糖类的量。该技术使多糖蛋白分子从电泳凝胶定量转移到全氟聚合物膜，然后它可以是酸水解，以确定所得到的蛋白质和糖单元。 多糖的结构和它的生物活性是糖生物学的基本部分。在TGC文献报道，到目前为止大多关注与提取，纯化和分子量测定的技术，只有有限的研究讨论TGC主结构及其解决方案构象的各个方面。从绿茶获得TGC是含有14％的蛋白结合多糖，并有不同的生物活性[20,21]。在本文中，TGC和其一级结构和溶液构象的单糖组合物已被鉴定通过的分析技术的组合的应用。因为主结构之间存在的关系，配置茶多糖和其生物活性，所获得的结果涉及多糖应当在生物和医学研究中是有益的。从实际考虑，结果还应该能够为基于多糖的功能性食品的开发提供技术指导。 1 试验 1.1 仪器，试剂和材料 (i) 仪器的工作条件。瓦里安3400气相色谱; 菲尼根离子阱探测器（瓦里安）; 石英毛细管柱，30m×0.32mm×0.25um，温度程序：50-140℃，30 ℃/min，140-190℃，5℃/min;载体气体：氦; 进样口温度：250℃;传输线温度：250℃;歧管温度：220℃; 电离模式：电子轰击;电子倍增器电压：1850伏; 电子能量：70 eV。 J-180 CD（Jasco，日本）;检测器温度：室温;狭缝宽度：1纳米;扫描速度为100nm/分钟;扫描范围：180-400 nm.瓦里安UNTY+500 NMR光谱仪（瓦里安）.UD7400紫外可见分光光度计（贝克曼）.HP-1100高效液相色谱仪（惠普）为G1315 BDAD（惠普）.ZK-82炉（上海）;THZ-8恒温摇床振动（嘉兴）;的Milli-Q水50 纯化系统（Millipore，美国）。 (ii) 试剂和材料。盐酸羟胺，乙酸酐，吡啶，硫酸， 碳酸钡，高碘酸钠，乙酸，乙二醇，氢氧化钠，氢硼化钾，刚果红，三羟基丙烷和四羟基丁烷都是分析纯试剂;标准的鼠李糖，阿糖胞苷，木糖，谷氨酸，人与半乳糖（生化试剂，上海试剂公司），超纯水。 TGC：分离江西省婺源县生产的老绿茶。凝胶过滤和HPLC分析都表明TGC包含单个组件。 1.2 分析方法 (i) 单糖组成:根据在文献中描述的方法水解TGC。通过GC-MS对水解产物进行分析。 (ii) 碘酸氧化和Smith降解。高碘酸盐氧化和TGC的Smith降解都按列在参考文献中描述的方法进行。标准单糖，三羟基丙烷和四羟基丁烷通过GC-MS使用在1.2(i)节中描述的方法甲基化衍生后进行分析。 （ⅲ）部分的酸水解。的部分酸水解中所用的方法在参考文献中描述。水解后，将上清液和沉淀物分别单独收集。上清液浓缩并干燥用于进一步的实验。另一方面，将沉淀物水解完全和其水解产物干燥用于进一步的实验。从上述步骤得到的固体衍生并且通过GC-MS进行分析。 （iv）NMR分析。在D 2 O中（2mg/ml）被记录为TGC解决所有质子NMR光谱。 （v）的CD分析。10ml的TGC水溶液稀释至50ml的容量瓶中。的TGC溶液另外10ml等分试样用4mL 刚果红色溶液（0.2mmol/l）和25毫升NaOH（0.1mol/l）混合。在使用前将混合物最终稀释至50ml容量瓶中。 （vi）