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　　两种凝血酶原提取方法的比较论文 赖翼 吴民泸 代娟 陈曼 段佳慧 刘阳 【摘要】 目的 比较等电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取凝血酶原的纯度。方法 分别采用等电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取凝血酶原，凝血酶原经单独钙离子激活得到凝血酶，通过凝血酶效价测定、蛋白质浓度测定，计算出凝血酶的比活性。结果 采用等电点沉淀法提取的凝血酶原经激活后得到的凝血酶比活性为11.01±1.54 U/mg，采用柠檬酸钡吸附法提取的凝血酶原经激活后得到的凝血酶比活性为130.17±12.30 U/mg，经配对T检验，P＜0.01.结论 与等电点沉淀法相比，采用柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取得到的凝血酶原纯度更高。 【关键词】 凝血酶原； 凝血酶； 等电点沉淀法； 柠檬酸钡吸附法 【Abstract】 Objective To pare the purity of prothrombin purified by method of precipitating at isoelectricpoint and adsorption method citrate from blood plasma of pig.Methods Prothrombin ethod of precipitating at isoelectricpoint and adsorption method citrate from blood plasma of pig and activated by Ca2+ only to thrombin.Then the titer of thrombin and the concentration of protein easured to get the specific activity of thrombin.Results The specific activity of thrombin activated by Ca2+ from prothrombin purified by method of precipitating at isoelectricpoint g.The specific activity of thrombin activated by Ca2+ from prothrombin purified by adsorption method citrate g.The specific activities bin purified by adsorption method citrate is higher than purified by method of precipitating at isoelectricpoint. 【Key bin； thrombin； method of precipitating at isoelectricpoint； adsorption method citrate 凝血酶是参与机体凝血过程的一个重要的凝血因子.freelol/L BaCl2溶液； 溶液B：0.02 mol/L Tris，0.15 mol/L BaCl2，0.10 mol/L NaCl，pH7.4； 溶液C：0.02 mol/L Tris， 0.10 mol/L NaCl，0.20 mol/L Na2EDTA，pH7.4； 溶液D：0.02 mol/L Tris，0.15 mol/L NaCl，pH6.5. 1.3 主要仪器 GE GeneQuant 1300核酸蛋白分析仪。 1.4 方法 1.4.1 凝血酶原提取 将收集到的5份猪血浆按1～5编号，各均分为2份，其中1份采用等电点沉淀法提取凝血酶原，另1份采用柠檬酸钡吸附法提取凝血酶原。 1.4.1.1 等电点沉淀法 猪血浆用蒸馏水稀释10倍，用5 %冰乙酸将其pH调至5.3，4℃静置过夜，3 000 r/min离心15 min，弃上清，沉淀用生理盐水溶解，过滤备用。 1.4.1.2 柠檬酸钡吸附法 猪血浆中加入溶液A，体积比为10∶1，4℃搅拌30 min，静置30 min后，3 000 r/min离心30 min，弃上清。沉淀用溶液B洗涤，3 000 r/min离心15 min，弃上清。重复洗3次。沉淀用溶液C解吸附，4℃搅拌0.5～1h，3 000 r/min离心15 min取上清。上清液用溶液D于4℃透析过夜。3 000 r/min离心15 min取上清液，即为凝血酶原溶液。 1.4.2 凝血酶原激活 用2 % Na2CO3溶液将凝血酶原溶液的pH调至7.1，加入0.25 mol/L CaCl2溶液，使Ca2+终浓度为0.03 mol/L，再用2 % Na2CO3溶液将凝血酶原溶液的