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SBS Genetech产品说明书 TM SuperBright MaxiSignal ECLSubstrate 61088 61089 咨询电话：400 666 3029 编号 描述 2 SBM-10 SuperBright MaxiSignal化学发光底物，足够用于200cm 膜 试剂盒包括：SuperBright MaxiSignal溶液A，10ml SuperBright MaxiSignal溶液B，10ml 2 SBM-50 SuperBright MaxiSignal化学发光底物，足够用于1000cm 膜 试剂盒包括：SuperBright MaxiSignal溶液A，50ml SuperBright MaxiSignal溶液B，50ml 储存：收到货后请4度保存。室温可保存半年。该试剂在环境温度运输。 目录 产品简介1 产品重要信息1 操作概述2 其他所需材料3 蛋白印迹法详细操作步骤4 常见问题及解决方案5 产品简介 SuperBright MaxiSignal化学发光底物是一种用于检测免疫印迹膜上辣根过氧 化物酶 （HRP）的极端灵敏的增强底物。该底物极强的信号输出能够使少量芬克 级别的抗原得到检测因此，应用该发光底物需要显著稀释一抗和二抗的浓度。信 号的敏感度、强度和持续时间使信号很容易利用照相或其它方式成像。印迹膜可 以反复在胶片上曝光以获得最佳结果，也可以先将膜上的免疫检测试剂进行剥离 并重新检测。 产品重要信息  为获得最佳效果，必须优化该系统的全部组分，包括样品量、一抗和二抗浓 度以及膜和封闭试剂的类型。由于该发光底物极度灵敏，应用SuperBright MaxiSignal比其它任何类似市面产品需要显著减少抗原量和抗体浓度。  使用该产品比使用沉淀比色HRP底物检测所需的抗体浓度低。为优化抗体浓 度，请进行一次系统的点印迹分析。  没有一种封闭试剂对所有系统而言都是最佳的，所以为每一个免疫印迹检测 系统找到最合适的封闭缓冲液非常必需。封闭试剂有可能与抗体产生交叉反 应，导致出现非特异性信号。封闭缓冲液同时也会影响系统的灵敏性。当从 一种底物转换为另一种底物时，有时会出现信号衰减或背景增加的现象，原 因可能是封闭缓冲液不适合新的检测系统。  使用亲和素/生物素检测系统时，避免使用牛奶作为封闭试剂，因为牛奶中 含有不定量的内源性生物素，会导致高背景信号。  保证洗涤缓冲液、封闭缓冲液、抗体溶液和底物工作液的使用体积，以确保 在整个实验过程中印迹膜完全被液体覆盖，避免膜变干。增大封闭缓冲液及 洗涤缓冲液的使用量可以降低非特异性的信号。  为获得最佳效果，在孵育步骤请使用摇床。  将Tween®-20 （终浓度0.05%）加入封闭缓冲液和稀释的抗体溶液，以降低非 特异信号。  不要使用叠氮化钠作为缓冲液的防腐剂。叠氮化钠是HRP的抑制剂。  避免手直接与膜接触，实验过程应戴手套或使用干净的镊子。  所有设备必须清洁且不沾染外来物质。金属器械 （如剪刀）不得具有可见的 锈迹。锈迹可能导致斑点形成和高背景。  底物工作液在室温下可稳定8小时。日光或任何其他强光下可能损害底物。 为获得最佳结果，将底物工作液保存在琥珀色瓶中，并避免长期暴露于任何 强光。短时间暴露于实验室常规照明不会损害该工作液。 操作概述 注：以保证阳性结果，可参考建议的抗体稀释度来优化实验。最优化的抗体浓 度需要预实验确定。 1. 稀释一抗至5-100 ng/ml。 2. 稀释二抗至2-10 ng/ml。 3. 将两种底物 （A和B）组分按1:1比例混合，制备底物工作液。 注：暴露于日光或任何其他强光可能损害工作液。为获得最佳结果，将此工作液 保存在琥珀色瓶中，并避免长期暴露于任何强光。短时间暴露于实验室常规照明 不会损害该工作液。 4.