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2017-06-15 发布于浙江
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SYAP1真核表达载体的构建及蛋白表达定位.pdf

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SYAP1真核表达载体的构建及蛋白表达定位

· l8 · 郑州大学学报 (医学版) 2014年 1月第 49卷第 1期 doi：10．3969／jiSSFt．1671-6825．2O14．01．006 SYAP1真核表达载体的构建及蛋白表达定位郝慧鑫¨，菅辉玲¨，朱美意，黄瑾¨，罗星 1)石河子大学医学院生物化学教研窒亓河子 832000 2)石河子大学第一附属医院急诊外科石河子 832000 #通讯作，男，1973年 10月生，博十，副教授，研究方向：蛋白质的功能与疾病，E—mail：Luoxingxing@126．com 关键训突触相关蛋白 1；亚细胞定位；真核表达载体【l1 分类号 R651，3 摘要目的：构建 peDNA3．1(一)一Mye一突触相关蛋F_Il(SYAP1)真核表达载体。方法：合成 SYAP1基因序列，加入 Myc标签序列、EcoR I和 HindIlI酶切位点，并与线性化 peDNA3．1(一)连接，得重组质粒 pcDNA3．1(一)一 Mye-SYAPI。重组质粒经菌落 PCR、酶切及测序鉴定正确后，脂质体转染 HEK293细胞，采用 Westernblot和间接免疫荧光法检测转染细胞中 SYAP1蛋的表达及定位情况。结果：Myc．SYAPI成功插入 peDNA3．1(一)载体， SYAPI蛋白成功表达且定位于胞浆。结论：pcDNA3．1(一)一Myc—SYAPI载体构建成功。 ConstructionofeukaryoticexpressionveetorofSYAP1and intracellular location HAO Huixi”“ JIAN Huiling” ZHUMeiyi ，HUANGfin” LUO Xing ，，， )DepartmentofBiochemistry，MedicalSchool，ShiheziUniversity，Shihezi832000 2)DepartmentrJ／’E— mergencySurgery，theFirstAffiliatedHo~ital，ShiheziUniversity，Shihezi832000 Keywords synapse—associatedprotein 1；subcellularlocation；eukaryoticexpression vector Abstract Aim：loconstructeukaryotieexpressionvectorpeDNA3．1(一)一Myc—SYAP1．Methods：SYAP1se— quenceWaSsynthesized，joinedwithMyc—tagsequenceandEcoR I，HindIIIrestrictionsites，andthenconnectedwithlin— earizedpeDNA3．1(一)．AtiertheidentificationbytheresultsofcolonyPCR。restrictionanalysisandsequencing，theplas— midwastransfected intoHEK293cellsbylipidtransfection，W esternblotant]indirectimmuno1]uoreseeneewereappliedto observetheexpression levelandpositionofSYAPIproteinin(：ells．Results：TheresultsofcolonyPCR，sequeneingand restrietion enzymedigestionshowedthatthetargetnucleotidesequencesweresuccessfullyinsertedintotheexpectedsitesof theveltot W csternblotshowedthatSYAPIproteinwassuccessfullyexpressedintransfeetedHEK293cells，andlind in