油镜使用实训报告.docVIP

实训一 显微镜油镜的使用和细菌的形态观察 一、实训目的 了解显微镜油镜工作原理，掌握油镜的使用和保养方法。 掌握细菌制片及简单染色技术，观察细菌形态。 二、实训原理 简单染色原理 细菌个体很小，而且多为透明或半透明，在水浸片中不容易观察。为清晰地观察到细菌的形态、大小及排列情况，需采用各种染色方法，使菌体着色，以增加菌体的显示力。 简单染色法是用一种染色液一次使菌体着色的方法，是微生物学中应用最广泛、操作最简单的染色方法。细菌细胞含有很多核酸，所以一般多用结晶紫、番红、美蓝、碱性复红、孔雀绿等碱性染料配成染色液进行菌体染色。 三、材料用具 载玻片、斜面菌种、结晶紫染色液、石炭酸复红染色液、香柏油、二甲苯、无菌水、显微镜、接种环、吸水纸、擦镜纸、酒精灯、火柴、洗瓶或小滴管。 四、方法步骤 （一）微生物的简单染色 1、涂片 在洁净无油脂的载玻片中央滴一小滴无菌水，按无菌操作法从斜面菌种刮取少量菌体，与水滴充分混匀成菌悬液，用接种环将菌悬液涂成均匀的薄层菌膜，涂片面积约1cm2左右。 2、干燥 将涂片于室温自然干燥，或将载玻片置于火焰高处微热烘干。注意勿在火焰上烘烤，以免菌体变形。 3、固定 手执载片一端，使涂菌的一面向上，将其迅速通过微火2-3次进行火焰固定。火焰固定时，用手擦涂片反面，以不烫手为宜。注意不能将载片在火上烤，否则易使菌体变形。 固定的目的是将菌体杀死，使菌体附着在载玻片上，染色时不致脱落，同时改变菌体对染色液的通透性，增加染色效果。 4、染色 滴加1-2滴染色液于涂菌处，并使染色液覆盖整个菌膜，染色1分钟左右。 5、水洗 倾去染色液，斜置载片，用洗瓶或自来水轻轻冲洗，注意不要直接冲在涂好的菌膜处，应由菌膜上端流下，洗至从载片上流下的水中无染色液的颜色为止。 6、干燥 自然晾干或用吸水纸轻轻地吸干，注意不要擦掉菌体。然后即可镜检。 （二）显微镜的使用方法 1、放置显微镜 将显微镜置于实验台上，镜座距实验台边沿3-4厘米。 2、调光 将低倍物镜转到工作位置，调节光强度，观察染色玻片时，光线宜强些；观察未染色玻片时，光线宜弱些。 3、低倍镜观察 首先上升镜筒或下降载物台，将玻片或细菌涂片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至物镜正下方，物镜降至距装片0.5厘米处，用粗调节器使物镜逐渐上升至出现物像时，改用细调节器调节至物像清楚为止。用推进器移动装片，将最适宜观察部位移至视野中心。 4、高倍镜观察 转动物镜转换器，将高倍镜移至工作位置，用细调节器校正焦距使物镜清晰，将最适宜观察部位移至视野中心。 5、油镜观察 上升镜筒或下降载物台约2厘米，转换油镜，在镜头下方的涂片上滴一滴香柏油。 用粗调节器慢慢降下镜筒或上升载物台，使油镜侵入油中至油圈不扩大为止，此时镜头几乎与装片接触。注意操作人员要从侧面仔细观察浸油镜头的整个过程，油镜头不能接触载玻片，以免压碎载玻片，损坏镜头。 用粗调节器徐徐上升镜筒或下降载物台，当视野中有物像出现时，再用细调节器校正焦距，直至物像清晰为止。 若因镜头离开油面而未找到物像，必须再按前述过程重复操作，直至物像看清为止。 观察完一个标本片后，必须先升镜筒或降下载物台后，在取下标本片，决不可从油镜下直接将制片抽出，以免损坏油镜。若想再次观察其他制片，也必须先升镜筒或下降载物台，换上其他制片，依次用低倍镜、高倍镜和油镜观察。重复观察时可比第一次少加香柏油。 （三）油镜的保养 1、清洗油镜头 镜检完毕后，上升镜筒或下降载物台，取出玻片，必须及时清洗油镜头。清洗时，用转换器将油镜转至一边，用擦镜纸轻轻擦去镜头上的大部分香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯擦掉残留的香柏油，最后用干净的擦镜纸擦净残留在镜头上的二甲苯。注意擦镜时勿用力在透镜上来回摩擦，严禁用纱布等擦拭镜头。 2、还原 将显微镜各部分还原，接物镜呈八字形降下。套上镜罩，对号放入镜箱中，置阴凉干燥处存放。 五、实训作业 绘出在油镜下观察到得细菌形态。