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小篮子法测定呼吸速率 【实验目的】 1.呼吸作用是反应植物生命活动强弱的重要指标之一。常用于植物生理研究及农业生产实践等方面。 2.有氧呼吸的方程式: C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O 3.测定CO2 释放量的方法: 滴定法、红外线CO2分析仪法 4.测定 O2吸收量的方法: 氧电极法 【实验原理】 在广口瓶中，放入一定量的Ba(OH)2溶液，用其吸收植物材料呼吸过程中释放的CO2。然后用草酸溶液滴定剩余碱量，由空白和样品二者消耗草酸溶液之差，计算出呼吸过程中释放的CO2量。 反应如下： Ba(OH)2 + CO2　　BaCO3＋H2O　 （1） Ba(OH)2(剩余)+H2C2O4 　 BaC2O4＋2H2O（2） (空白滴定值-样品滴定值)× mg CO2 呼吸速率= 植物组织鲜重 ×时间 呼吸速率的单位一般可采用mg(CO2) · g-1 FW · h-1， mg CO2·ml-1草酸＝1 【实验材料】 萌发的小麦和大麦种子 实验仪器： 1、广口瓶测呼吸装置： 广口瓶一只，加一只三孔橡皮塞，一孔插入装有碱石灰的漏斗，漏斗口塞棉花，将压碎的碱石灰粉末覆盖于棉花上，能吸收进入瓶中的CO2，另一小孔供滴定用，平时用一小橡皮塞塞紧；第三孔插入温度计，记录测定时的温度。瓶盖下面装一小钩，以悬挂小筐，供装植物材料用。 2. 酸式滴定管：装草酸 实验试剂： 1.Ba(OH)2溶液 2.1/44 mol/L草酸溶液：每ml溶液相当于1mg的CO2 3.0.05 mol/L-1Ba (OH)2溶液(密封保存) ，溶液配好后先过滤到试剂瓶中，塞紧试剂瓶，尽量减少溶液曝露在空气中的时间，以减少BaCO3 沉淀的产生 4.酚酞指示剂：1g 酚酞溶于100 ml 95%乙醇中 【实验步骤】 1、空白滴定： a． 通过滴定孔向广口瓶内放入Ba(OH)2溶液20 ml，加入2滴酚酞试剂。 b． 塞紧小橡皮塞，摇动广口瓶几分钟，使瓶内CO2 充分吸收。 c．待瓶内CO2吸收后，拔出小橡皮塞，把酸式滴定管插入小孔中，用草酸滴定，至红色刚刚消失为止。 记下草酸溶液用量的毫升数，即为空白滴定值。 2、准备植物材料：取待测小麦或大麦种子8 g(约100粒) ，在天平上称出重量，装在小篮中。 3、正式滴定： a萌发的种子 倒出废液，用蒸馏水洗凈广口瓶，重加20 ml Ba(OH)2溶液于瓶内，将装有待测种子的小篮迅速挂在小钩上，塞紧瓶塞。 b 煮熟的种子 方法同上。 开始记录时间，30分钟后，小心打开瓶塞，迅速取出小篮，立即重新盖紧瓶塞，充分摇动2分钟，使瓶内CO2的完全被吸收，从滴定孔中滴入2滴酚酞。其余操作如前，记下草酸用量，即为样品滴定值。 【实验结果】 大麦 7.2079g 7.1604g 空白 活 死 39.2ml 36.5ml 36.9ml 小麦 9.5321g 8.7185g 空白 活 死 29.5ml 25.7ml 25.8ml 温度：20℃ 大麦呼吸速率=（39.2-36.5）* mg CO2/（7.2079g*0.5h） =0.7492 mg(CO2) · g-1 FW · h-1 小麦呼吸速率=（29.5-25.7）* mg CO2/（9.5321g*0.5h） =0.7973 mg(CO2) · g-1 FW · h-1 【讨论】 本次实验本应该用死种子的滴定值减去活种子的滴定值来计算种子的呼吸速率，但是测出的死种子的滴定值原理上应该与空白对照相差不大，但实验结果表示，死种子滴定值与活种子的滴定值差不多，可能原因是：煮沸10分钟的时间是不够的，不足以杀死种子。所以，用空白减去活种子滴定值来计算呼吸速率。 因为本次实验是第一次选作，所以煮沸时间估计不当，下次实验应该注意。 操作时勿使口中呼出的气体进入瓶中。 测定期间轻轻地摇动广口瓶，破坏溶液表面的BaCO3薄膜，以利CO2的吸收。 将滴定管轻轻插入橡皮塞中，摇动广口瓶时握住滴定管，以免折断滴定管。