SD大鼠骨髓间充质干细胞在-80℃低温条件下的冻存2.docVIP

SD大鼠骨髓间充质干细胞在-80 ℃低温条件下的冻存 陈 凯1，李欣然2，宣 言3(1河北工程大学农学院，河北省邯郸市 056021；2驻马店市驿城区农业局，河南省驻马店市 463000； 3邯郸市第一中学，河北省邯郸市 056001) 引用本文：陈凯，李欣然，宣言. SD大鼠骨髓间充质干细胞在-80 ℃低温条件下的冻存[J].中国组织工程研究，2016，20(10): 1433-1438. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.10.009 ORCID: 0000-0003-1741-1546(陈凯) 文章快速阅读： 文题释义： 细胞冻存：利用低温降低细胞代谢，使细胞处于停止生长的“休眠”状态，以便于细胞的长期储存。冻存的效果主要与降温步骤、冻存保护液的选择、冻存温度、复温速率及用于冻存的细胞生长状态有关。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作为保护剂。 二甲基亚砜：是一种渗透性保护剂，能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。 摘要 背景：以-80 ℃作为冻存温度条件，探索一种低消耗，简单易行的骨髓间充质干细胞贮存方法。 目的：筛选适于骨髓间充质干细胞冻存的最适保护液，并验证骨髓间充质干细胞经较长期低温冻存后的生物学特性。 方法：贴壁培养骨髓间充质干细胞，免疫荧光法鉴定骨髓间充质干细胞的生物学特性及纯度；以-80 ℃为温度条件，不同配比的低糖DMEM培养基、胎牛血清和二甲基亚砜作为冻存保护液，短期冻存骨髓间充质干细胞，选择适于骨髓间充质干细胞冻存的最适保护液；以选择出的保护液冻存骨髓间充质干细胞，分别于1，3，6个月复苏，并继续培养，传代；对传代细胞行免疫荧光鉴定，确定在-80 ℃下保护液对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响。 结果与结论：采用80%DMEM+体积分数为10%胎牛血清+10%二甲基亚砜作为冻存保护液，适于在-80 ℃条件下冻存骨髓间充质干细胞，复苏后的细胞能够在体外增殖，并正常传代，冻存后的骨髓间充质干细胞仍可保持原有的生物学活性。 关键词： 干细胞；骨髓干细胞；细胞培养；骨髓间充质干细胞；二甲基亚砜；冻存保护液 主题词： 骨髓；间质干细胞；二甲亚砜；低温保存；组织工程 Cryopreservation of bone marrow mesenchymal stem cells from Sprague-Dawley rats at -80 ℃ Chen Kai1, Li Xin-ran2, Xuan Yan3 (1School of Agronomy, Hebei University of Engineering, Handan 056021, Hebei Province, China; 2Agriculture Bureau of Yicheng District, Zhumadian 463000, Henan Province, China; 3Handan No. 1 High School, Handan 056001, Hebei Province, China) Abstract BACKGROUND: We attempt to explore a low-cost, simple and effective way to cryopreserve bone marrow mesenchymal stem cells at -80 ℃. OBJECTIVE: To screen the optimal cryopreservation fluid for bone marrow mesenchymal stem cells and to verify the biological features of bone marrow mesenchymal stem cells after long-term cryopreservation. METHODS: Bone marrow mesenchymal stem cells were cultured using adherent method and the biological features and purity of cells were detected using immunofluorescence method. Bone marrow mesenchymal stem cells were cryopreserved in the cryoprotectant medium containing low-sugar DMEM,