腹泻性贝毒软海锦酸快速免疫检测技术研究.pdfVIP

答辩委员会成员名单 ● 姓名 工作单位 职称 备注 马家海 上海海洋大学 教授 主席 王全喜 上海师范大学 教授 委员 严兴洪 上海海洋大学 教授 委员 委员 委员 委员 ● 委员 贾睿 上海海洋大学 副教授 秘书 上海海洋大学 2010年 答辩地点 水产与生命学院 答辩日期 6月12日 B435 ● 腹泻性贝毒软海绵酸快速免疫检测技术研究 摘要 ● 腹泻性贝毒(Diarrlletic 甲藻属产生的一类脂溶性多环醚类生物活性物质，主要成分是软海绵酸(Okadaic Acid，OA)及其衍生物。腹泻性贝毒可在贝类等滤食性动物体内富集，因而危害 食用者健康。近年来关于腹泻性贝毒的事件在我国均有报道。腹泻性贝毒的主要 检测分析方法有生物毒性法、液相色谱法以及免疫化学法。本研究采用碳二亚胺 方法合成了软海绵酸与蛋白载体的偶联物，分别用作免疫抗原和包被抗原。通过 免疫Balb／cd、鼠，利用细胞融合技术，制各了抗软海绵酸的单克隆抗体，建立了软 海绵酸的间接竞争酶联免疫检测技术和胶体金标记免疫层析检测技术。结果表明： 用抗OA单克隆抗体建立的间接竞争酶联免疫检测方法，最低检出限为0．45ng／ml， 灵敏度为2．59 ng／rra，平均回收率为92．04％，平均变异系数为3．52％。用抗OA单克 ● 隆抗体建立的胶体金标记免疫层析快速检测方法，检测时间为3．5min，检出限为 25ng／ml。本研究建立的酶联免疫检测方法和胶体金标记免疫层析检测方法完全可 以满足国家规定的检测贝类中软海绵酸201．tg／1009贝肉的安全阈值，也为我国有毒 赤潮腹泻性贝毒的监测与食品安全检验提供了技术基础和快速检测产品。 关键词：腹泻性贝毒，软海绵酸，单克隆抗体，酶联免疫吸附，胶体金免疫 层析 ● The OnEstablishmentOfFastDetectionMethodWith Study McAb-based For lmmunoassayTechnologyDetecting Okadaic