维生素K2诱导人食管癌ECa109细胞凋亡及其机制研究.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 研究论文 维生素K2诱导人食管癌ECa．109细胞凋亡及其相关性研究 前言……………………………………………………………………7刖舌 ………………………………．．…………………………………．’7 材料与方法………………………………………………………………8 结果……………………………………………………………………13多口木……………………………………………………………………I) 附图……………………………………………………………………16 附表……………………………………………………………………37 讨论……………………………………………………………………39 结论……………………………………………………………………43 参考文献………………………………………………………………43 综述维生素K2的抗肿瘤作用及其研究进展……………………………．46 致谢…………………………………………………………………………62 个人简历……………………………………………………………………63 中文摘要 维生素K2诱导人食管癌ECa．109细胞凋亡 及其相关性研究 摘 要 目的：本研究拟从细胞分子水平研究维生素K2(VK2)对食管癌细胞 增殖、凋亡、细胞周期以及相关蛋白表达的影响，进一步探讨VK2的抗肿 瘤作用及其可能的作用机制，为食管癌综合治疗寻找新的抗肿瘤辅助药 物。 化，选择最佳的实验浓度和作用时间； VK2作用 2采用倒置相差显微镜及透射电镜(TEM)观察40“mol／ml 72h后，ECa．109细胞形态学变化； 3采用流式细胞技术(flow 况以及Caspase．3、Bcl．2和Bax蛋白的表达变化情况； 4采用免疫组化技术检测ECa．109细胞经不同浓度(20、40、 结果：1 VK2 2h后，各实验组抑制率均有不同程度升高，与对照组相比，有显著性差 异(p0．05)。随着VK2浓度的增加、作用时间的延长，抑制率逐渐升高。 士2．140％、40．14士2．3 抑制率以1609mol／ml umol／L附近。 对ECa．109细胞作用72h的半数抑制浓度IC50值在40 2倒置相差显微镜下观察细胞形态变化结果显示：空白对照组细胞生 中文摘要 后的细胞出现贴壁不良，细胞皱缩，破裂，呈圆形或卵圆形，细胞胞浆中 出现空泡。 常ECa．109细胞胞膜完整，表面有大量绒毛样突起。细胞核大、形态不规 则，核仁大而明显，内染色质均匀分散，密度一致，细胞质内细胞器丰富， 核局部向外呈锐角突起，核染色质高度浓缩，电子密度增高，边集于核膜 下，形成沿核膜收缩的新月形小体，有的出现核固缩和核碎裂，偶见凋亡 小体。 72h后，流式细胞仪可测得典型的亚二倍体凋亡峰，凋亡百分率分别为 理组与空白对照组相比及各处理组之间比较均有显著性差异(pO．05)； VK2处理的细胞S期 分布在G2／M期(13．47％)。经20、40、80pmol／ml 80pmol／ml 值均随处理浓度增大而逐渐升高，而Bcl．2蛋白的荧光指数FI值随处理 浓度增大而逐渐减少。Bax蛋白的荧光指数FI值随处理浓度增大而无明 组无显著性差异(PO．05)。 的增大而逐渐升高，Bcl．2蛋白的细胞阳性百分率则随药物浓度的增大而 中文摘要 逐渐减小，Bax蛋白的细胞阳性百分率却随药物浓