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方法学验证的相关内容学习 [日期：2008-09-17] 来源：中国药品生物制品检定所? 作者：wangchen [字体： HYPERLINK javascript:ContentSize(16) 大 HYPERLINK javascript:ContentSize(14) 中 HYPERLINK javascript:ContentSize(12) 小] 本文由wangchen根据药物所张金兰教授的授业内容整理而成 内容提要：（方法学验证的应用、依据、类型、一般参数、要求） 验证应用：方法验证是对测定方法的评价，是建立新方法的研究内容和依据。 （新建方法、已建立方法的修订验证、已建方法的复现） 验证依据：方法应用领域对方法验证要求的“指导原则” 验证类型：全部验证Fall validation、部分验证Partial validation、交叉验证cross validation l???????? Full validation：第一次新建方法；一个已建方法，但增加分析对象（精密、回收）。 l???????? Partial validation：（已建方法的部分改变） 1)??????? 分析方法改变（检测器改变）； 2)??????? 生物样品（抗凝剂改变）； 3)??????? 基质改变（血－尿）； 4)??????? 前处理方法改变； 5)??????? 生物样品种属改变（rat大鼠－mouse小鼠）； 6)??????? 仪器改变工作软件改变； 7)??????? 稀有生物样品，取样量有限。 l???????? Cross validation：样品分析在不同场所或实验室进行时，不同实验室需进行加样生物样品或实际样品分析，建立实验室间的重现性数据。当分析数据由不同检测技术产生时 LC－MS vs ELSD 需交叉验证 部分验证：准确度，精密度（都做） 交叉验证：加样准确度，实际样品分析（任一） 一般参数： 精密度precision: 同一匀质样品的一组测量值，彼此符合的程度。 1)????? SD 标准偏差 standard deviation 2)????? ％RSD 相对标准偏差relative SD， CV 变异系数 n8 标准差 SD=开方（求和（xi－x均值）/（n－1）） ％RSD＝SD/x均值×100％ l???????? 日内精密度（intraday precision）：同一次测定，7～10份，按方法做。测定，SD值，RSD限度（生物制品5％，药品2％）。 l???????? 日间精密度（interday precision）：不同一次测定，7～10份，按方法做。测定，SD值，RSD限度（生物制品15％，药品5％）。 准确性accuracy： l???????? 结果与真值的接近程度，表示分析方法测定的正确性，通常用回收率实验表示（加样回收率）。 l???????? 回收率＝（测定液测定值－原样液含测值）/加入量值×100％ 灵敏度： l???????? 检测限（limit of detection LOD）：分析方法能从背景信号中区分出药物，所需样品中药物的最低浓度，LOD反映方法与仪器的灵敏度和噪音也表明样品经处理后本底值的高低。S/N3 l???????? 定量限（limit of quantitation LOQ）在保证具有一定可靠性（一定准确度和精密度）分析方法能够测定出样品中药物的最低浓度。反映分析方法测定含药物的低浓度样品时的可靠性。 选择性（selectivity）： 分析方法从其他成分中区分并定量目标成分的能力 l???????? 专属性（specificity）：指一种方法仅对一种分析成分产生唯一信号 l???????? 选择性（selectivity）：指一种方法可对多种成分产生不同响应，主要成分响应可与其他成分区分 选择性的区分选择内容： n???????? 化药：杂质、降解产物、相关化合物、制剂辅料（可通过空白比较和添加法所得分析结果比较确定） n???????? 体内药物：内源性物质、代谢物、分解产物、分析中的相伴物、内源性代谢物 n???????? 体内药分的选择性内容：空白生物样品（血尿、胆汁等）、至少六个来源的生物样品（非MS方法）、每个空白样品均测定干扰和LOQ。 线性（liner）： l???????? 给定范围内获取与样品中供试物浓度成正比的试验结果的能力 l???????? 线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的试验结果，而且呈线性的供试物浓度的变化范围其最大、最小量间的间隔。 l???????? 浓度范围包括5-8个浓度点，标准曲线应覆盖样品浓度范围。 1.?????? 药物一般80-120%（但低限不低于LO