第十一章紫外可见法.ppt

* 示例 芦丁含量测定 0.710mg/25mL * 3．对照法 相同条件下配制样品溶液和标准溶液，在同一波长处测二者吸光度 例：精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL； 另配制对照液，精密称定对照品25.00mg ，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液注射液的浓度？ 二、定量分析 小 结 1. 掌握光度法的基本原理 2. 掌握吸收系数：ε， 及其使用（定性定量） 3. 了解影响 Beer 定律的因素 4. 掌握仪器主要有的部件。尤其：光源、吸收池 检测器 5. 一般了解仪器光路图 6. 重点掌握定量分析方法 7. 掌握术语：生色团、助色团、红移、紫移、R、K、B、E带 解： 1．取咖啡酸，在165℃干燥至恒重，精密称取10.00mg，加少量 乙醇溶解，转移至200mL容量瓶中，加水至刻度线，取此溶 液5.00mL，置于50mL容量瓶中，加6mol/L的HCL 4mL，加 水至刻度线。取此溶液于1cm比色池中，在323nm处测定吸 光度为0.463，已知该波长处的 ，求咖啡酸百分 含量 解： 2．精密称取0.0500g样品，置于250mL容量瓶中，加入 0.02mol/L HCL溶解，稀释至刻度。准确吸取2mL，稀释至 100mL。以0.02mol/L HCL为空白,在263nm处用1cm吸收池 测定透光率为41.7%，其摩尔吸光系数为12000，被测物分 子量为100.0，试计算263nm处 和样品的百分含量。 * * * * * * * 1、适用条件： 1) 单色光 2) 稀溶液（10-2 ～10-5 M） 2、吸收度的加和性：a、b、c三种物质共存时 3、该定律适用于固体、液体和气体样品 公式讨论： * 4、吸光系数（E）：吸光物质在单位浓度及单位厚度时的 吸光度。根据浓度单位的不同，分为： （1）摩尔吸光系数ε 在一定λ下，c=1mol/L，l=1cm时的吸光度 （2）百分吸光系数 在一定λ下，c=1g/100ml，l=1cm时的吸光度。 （3）两者关系 公式讨论： * 吸光系数的讨论 1、吸光系数不随浓度和光程长度的改变而改变， 仅与物质本身的性质有关，与待测物浓度无关； 2、（1）不同物质，对同一λ，ε一般不同；（ ε ↑ ，吸光能力↑ ） （2）同一物质，对不同λ，ε一般不同（εmax） * 例：氯霉素（323.15），λmax=278 nm，C = 2.00mg/100ml T% = 24.3% ，l =，1 cm,求： , ε * 六、偏离Beer定律的因素 （一） 化学因素 Lambert-Beer定律适用范围：稀溶液（＜10-2mol/L） 溶液中溶质可因浓度改变而有离解、缔合与溶剂间的作用等原因,而发生偏离Beer定律的现象。 六、偏离Beer定律的因素 亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱 (a) 6.36×10-6 mol/L (b) 1.27×10-4 mol/L (c) 5.97×10-4 mol/L （一） 化学因素 Lambert-Beer定律适用范围：稀溶液（＜10-2mol/L） 溶液中溶质可因浓度改变而有离解、缔合与溶剂间的作用等原因,而发生偏离Beer定律的现象。 对此可控制溶液浓度、pH等条件而设法减免。 六、偏离Beer定律的因素 * （二） 光学因素 a. 非单色光 理论要求：平行单色光， 实际：光源复合光 六、偏离Beer定律的因素 照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光 其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定 为了保证透过光对检测器的响应，必须保证一定的狭缝宽度，这就使分离出来的光具一定的 谱带宽度 * b.杂散光的影响： 杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远 杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成 杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值 六、偏离Beer定律的因素 （二） 光学因素 * c.反射光和散射光的影响： 反射光和散射光均是入射光谱带宽度内的光 可使透射光减弱， A↑，一般可用空白对比校正消除 d．非平行光的影响： 使光程↑，l ↑ ，A↑ 六、偏离Beer定律的因素 （二） 光学因素 * （三）透光率的测量误差——ΔT