基因病的诊断总2012_培训课件.ppt

* GJB2基因 定位于13q11,gDNA长5510 bp,含有2个外显子，只有2号外显子参与编码,编码区长681bp GJB2基因编码产物为间隙连接蛋白分子26（connexin 26，CX26） CX26在细胞与细胞间形成间隙连接，在感觉毛细胞受到声音的刺激后钾离子回流到内淋巴液的过程中起着重要的作用。 检测方法：PCR+测序 目前已报道的致病突变有191种。 其中235delc为最常见的突变形式，占75% SLC26A4基因 定位于7q31，gDNA长约57kb,由21个外显子组成，编码序列长2343bp。 SLC26A4基因编码pendrin蛋白，为膜蛋白分子，介导阴离子转运。 pendrin蛋白在耳内主要表达于内淋巴导水管及内淋巴囊，球囊和椭圆囊，耳蜗内的外侧沟，参与维持内耳的离子浓度。 检测方法：对21个外显子直接测序 药物性耳聋 已知的耳毒性药物有近百种 氨基甙类抗生素（链霉素、卡那霉素、新霉素、庆大霉素等），最为常见。 大环内酯类抗生素（红霉素等） 抗癌药（长春新碱、2－硝基咪唑、顺氯氨铂） 水杨酸类解热镇痛药（阿司匹林等） 抗疟药（奎宁、氯奎等） 袢利尿剂（速尿、利尿酸） 抗肝素化制剂（保兰勃林） 铊化物制剂（反应停） 线粒体12SrRNA基因 在线粒体基因突变导致耳聋的患者中，绝大部分是由于A1555G突变引起。 检测方法：PCR+测序 引物名称 引物序列 12SrRNA-F CCTCAACAGTTAAATCAAC 12SrRNA-R CTCTGGTTCGTCCAAGTG 脆性X综合征 脆性X综合征（fragile X syndrome），是最常见的X连锁的单基因性智力低下综合征。 1969年美国Lubs在X连锁智力低下的家系中，发现带有一条长臂末端具随体样结构的X染色体，1977年澳大利亚Sutherland将这种随体样结构定位于Xq27，并命名为脆性部位（fragile site），脆性X综合征因此得名。 　 发病率仅次于21-三体综合征 群体发病率： 男性全突变率 1：3600~4000， 女性全突变率 1：4000~6000 FXS临床特征 智力障碍 男性患者大多数都表现为中度至重度智力障，这与甲基化嵌合体及前突变/全突变嵌合体有关 约有30%-50%的女性全突变携带者患病，大多数表现为难以觉察的或轻度的智力障碍，女性全突变携带者是否患病及患者智力障碍的差异是由于X染色体差异性失活所致。 特殊面容 颜面瘦长、前额突出 、耳朵大 、下颌大 、嘴大唇厚、上门齿长 腭弓高 头围大 大多数男性患者在青春期发育后出现大睾丸 语言障碍 许多患者都具有与智力水平相应的语言障碍，较差的听力和记忆力，有的患者在受到刺激时，不仅词语少、吐词不清，而且没有正确的语言表达形式，有的还有轻度的发音缺陷、典型口吃。 行为异常 可分为截然不同的两类：一类表现为胆怯、忧虑、性情孤僻、表现礼貌、且有一定技能；另一类则表情欢快、好动、情绪烦躁、手势能力增强，甚至行为暴躁。 结缔组织异常 皮肤松软，张力减弱，关节松弛过度伸展，扁平足，关节脱位，二尖瓣脱垂等 神经内分泌功能障碍症状 出生过重、巨头、身材过长等过度生长表现 前突变男性携带者可有迟发性的进行性小脑性共济失调和意向震颤 。 前突变女性携带者可出现过早的绝经和卵巢功能衰退 FMR1基因 定位Xq27.3，全长约38kb，17个外显子 5’端有一个(CGG)n 三核苷酸串联重复序列，在其上游大约250bp处有一个CpG岛。 致病机理 检测方法 PCR扩增FMR1基因(CGG)n重复序列 RT-PCR扩增FMR1基因的cDNA序列 Southern blotting (CGG)n FMR1-1 FMR1-2 5’ 3’ PCR扩增FMR1基因(CGG)n重复序列 AAAAA TTTTT mRNA cDNA 逆转录 FMR1 正向引物 反向引物 RT-PCR扩增FMR1基因的cDNA序列 (CGG)n PCR RT-PCR SRY基因 先证者为全突变患FXS者，胎儿为男性正常胎儿。 Southern Blotting原理 ?将待检测的DNA分子用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离。 继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上。 固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。 如果待检物中含