【2017年整理】琼脂糖凝胶电泳.pptVIP

* * 琼脂糖凝胶电泳 与蛋白质分子相类似，核酸分子也是两性电解质。 ⑴在pH3.5时，核酸分子带正电荷，在电场中向负 极移动； ⑵在pH8.0～8.3时，碱基几乎不解离，磷酸全部解 离，核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。 琼脂糖凝胶电泳是采用琼脂糖凝胶作为电泳支 持物的一种简单、快速分离纯化和鉴定核酸特别 是DNA的方法。 琼脂糖主要从海洋植物琼脂中提取出来的，为一 种聚合链线性分子。琼脂糖凝胶的孔经较大，主要 用于分离较大片段的DNA分子（100bp～60kb）。 一、电泳基本原理 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. ⑶ 不同大小和构象的核酸分子电荷密度大致相同，在自由泳动时，各核酸分子的迁移率区别很小，难以分开。但采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，发挥分子筛的功能，使得分子大小和构象不同的核 酸分子泳动率产生较大的差别，则可达到分离的目的。 ⑷ DNA片段在凝胶上移动的距离在一定范 围内是分子质量的函数，分子质量越大，移 动越缓慢。因此，利用琼脂糖凝胶电泳相对 于标准DNA的移动度，可测定DNA片段的相 对分子质量。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 琼脂糖凝胶浓度与DNA分子的有效分离范围 胶浓度（％） 线性DNA分子大小（kb） 0.3 5～60 0.6 1～20 0.7 0.8～10 0.9 0.5～7 1.2 0.4～6 1.5 0.2～4 2.0 0.1～3 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 二、仪器设备及材料 1、电泳装置：包括电泳槽（多采用水平方式）、 胶床和梳子三部分组成。 2、稳压电泳仪：电压可变范围0～300～600V， 电流可变范围0～250～500mA。 3、紫外线检测仪：可产生254、302、366nm 3个 波段紫外线，并配备防护眼镜和5mm厚的黑色 有机玻璃防护板。 4、照相机： 5、微波炉： 6、其它：三角烧瓶、量筒、胶带纸、一次性手套等。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 三、主要试剂 1、琼脂糖：根据需要用电泳缓冲液配成不同浓度。 本实验配制 2％ Agrose： 2g Agrose 100ml 0.5×TBE EB少许（终浓度0.5μg/ml） 2、电泳缓冲液： 常用的缓冲液有TBE、TAE和TPE三种。 本实验选用TBE，先配制5×TBE 贮存液： 54g Tris碱 27.5g 硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA (pH 8.0) （或4.65g EDTA） 加dd H2O至1000ml。用时稀释为0.