第3章-核酸化学.ppt

（二）. 核酸的复性 将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。变性的DNA缓慢冷却时可复性，因此又称为“退火”。 退火温度＝Tm－25℃ 1.复性的概念 变性核酸的互补链在适当的条件下，重新缔合成为双螺 旋结构的过程称为复性。 DNA复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般 只能得到部分的恢复，具有减色效应 2.退火温度 3.复性影响因素 片段浓度/片段大小/片段复杂性（重复序列数目）/ 纯度/溶液离子强度 （三）. 核酸的复性与分子杂交 Δ 退火 复性 杂交 变性 两个不同来源 的DNA分子 分子杂交 定义：在退火条件下，不同来源的DNA互补区形成氢键，或DNA单链和RNA链的互补区形成DNA-RNA杂合双链的过程。 探针：用放射性同位素或荧光标记的DNA或RNA片段。 原位杂交技术：直接用探针与菌落或组织细胞中的核酸杂交，能准确反映出核酸所在的位置在组织细胞中的功能状态。 点杂交：将核酸直接点在膜上，再与核酸杂交。 Southern印迹法：将电泳分离后的DNA片段从凝胶转移到硝酸纤维素膜上，再进行杂交。 Northern印迹法：将电泳分离后的RNA吸印到纤维素膜上再进行分子杂交。 5′-磷酸端（常用5’-P表示）；3′-羟基端（常用3’-OH表示） 多聚核苷酸链具有方向性，当表示一个多聚核苷酸链时，必须注明它的方向是5′→3′或是3′→5′。 多聚核苷酸的表示方式 DNA RNA 5′PdAPdCPdGPdTOH 3′ 5′PAPCPGPUOH ′ 或5′ACGTGCGT 3′ 5′ACGUAUGU 3′ ACGTGCGT ACGUAUGU T 5’ 3’ OH U 5’ 3’ OH 第二节 RNA的结构 RNA一级结构研究最多的是tRNA、rRNA以及一些小分子的RNA。其中 tRNA分子具有以下特点： 分子量25000左右，大约由70－90个核苷酸组成，沉降系数为4S左右。 分子中含有较多的修饰成分。 3‘-末端都具有CpCpAOH的结构。 三、RNA一级结构的特点 大多数真核细胞mRNA在3`-末端有一段长约200个残基的多聚腺苷酸（Poly A） 真核细胞mRNA的5`-末端有一极为特殊的帽子结构，称为“帽子（Cap）”：m7GpppNm AA….AA ~200A Poly A 3`-端 5`-端 帽子结构 非编码区 非编码区 编码区 mRNA一级结构的特点： 第二节 RNA的结构 RNA是单链分子，因此，在RNA分子中，并不遵守碱基种类的数量比例关系，即分子中的嘌呤碱基总数不一定等于嘧啶碱基的总数。 RNA分子中，部分区域也能形成双螺旋结构，不能形成双螺旋的部分，则形成突环。这种结构可以形象地称为“发夹型”结构。 在RNA的双螺旋结构中，碱基的配对情况不象DNA中严格。G 除了可以和C 配对外，也可以和U 配对。G-U 配对形成的氢键较弱。不同类型的RNA, 其二级结构有明显的差异。 tRNA中除了常见的碱基外，还存在一些稀有碱基，这类碱基大部分位于突环部分 四、RNA的高级结构 ——RNA分子是含短的不完全的螺旋区的多核苷酸链。 主要特征：1.一臂四环：氨基酸臂：3′端有CCAOH的共有结构；反密码环：环上的反密码子与mRNA相互作用； D环：其上有二氢尿嘧啶（D），与识别酶有关； TψC环：含有T和ψ，与识别核糖体有关； 可变环：其上的核苷酸数目可以变动；2.含有修饰碱基和不变核苷酸，修饰碱基约为10%。 （一）tRNA的二级结构 在三叶草型二级结构的基础上，突环上未配对的碱基由于整个分子的扭曲而配成对，目前已知的tRNA的三级结构均为倒L型 （二）tRNA的三级结构 第三节 DNA的结构 一、DNA的一级结构 因为DNA的脱氧核苷酸只在它们所携带的碱基上有区别，所以脱氧核苷酸的序列常被认为是碱基序列（base sequence)。通常碱基序列由DNA链的5′→3′方向写。DNA中有4种类型的核苷酸，有n个核苷酸组成的DNA链中可能有的不同序列总数为4n。 pAGTOH P 第三节 DNA的结构 二、DNA的双螺旋结构 1953年，Watson 和Crick 提出。 1951年 Franklin和 Wilkins利用X-射线衍射方法分析了DNA的晶体，得到了DNA X-射线衍射图。从衍射图推测出DNA的结构是一个螺旋结构，螺旋沿着螺旋的