第3章 生物样品与样品制备.ppt

D:SPE的种类 亲脂型 大孔吸附树脂；亲脂性键合相硅胶 亲水型 硅胶；硅藻土；棉纤维 离子交换型 E:亲脂性键合相硅胶 十八烷基键合相硅胶最常用；吸附非 极性药物，易于有机溶剂洗脱；常见商品Sep-Pak C18 亲脂性键合相硅胶SPE的操作 （1）甲醇湿润小柱，活化填料 （2）用水或缓冲盐冲洗小柱 （3）加样，样品和小柱接触，弃去废液 （4）用水或缓冲液冲洗小柱 （5）选择洗脱液洗脱，收集洗脱液 （6）用洗脱液测定或浓集 亲脂性键合相硅胶SPE注意 （1）体液样品可直接上样，体积0.1-2ml，流速1-2ml/min （2）萃取碱性药物其中残存的羟基与药物的静电作用，甲醇 等很难洗脱，需加酸等 （3）苯基、氰基柱有一定极性，极性药物吸附力大，用极性 溶剂洗脱 亲脂性键合相硅胶SPE特点 （1）方便、省时 （2）洗脱溶剂量少 （3）用多个柱同时萃取 I:其他SPE小柱 （1）苯基硼酸键合硅胶 选择性的萃取血浆中β-拮抗剂 （2）环糊精键合硅胶 选择性的萃取磺胺类 （3）免疫亲和固定相 萃取生物大分子 G:离子交换树脂 （1）弱酸性药物 中性或碱性下，用阴离子交换树脂萃取，甲 醇清洗，酸性溶液洗脱 （2）碱性药物 方法相反 （3）适合高极性，可电离的药物，回收率90%以上 H:亲水型填料 填料硅胶、硅藻土、棉纤维 （1）为分配作用 （2）萃取 样品加到柱上，分布到填料表面，用水不容的有极 相洗脱亲脂性药物 第三章 生物样品与样品制备 第一节 生物样品的种类、采集、制备与贮存 一.生物样品的种类、采集和制备 1.血液：血浆、血清和全血 1）血样的采集 A:药物在血液中分布均匀后采样 B:从静脉、动脉和心脏（动物），常用的是静脉采血 C:1-5ml，动物总血量1/10 D:避免溶血 2）血样的制备 A:制备血浆 B:制备血清 C:制备全血 D:血浆和血清的区别 抗凝剂；血浆量（50-60%），血清 量（20-40%）；纤维蛋白原；C血浆=C血清 E:用全血分析 测定细胞内、外液的浓度；血浆中药物浓 度波动大；血浆中药物浓度低而细胞内药物浓度高 F:血样是创伤性获得，尤其是多次采样 G:用于药代动力学、F、血药浓度监测 2.尿液 用于药物剂量回收、药物尿清除率、生物等效性 A:尿液中原形药、代谢物、缀合物等 B:尿液特点 量大；非创伤性；尿液中药浓度较高 C:尿液缺点 食物饮；水影响；排汗 D:尿液性质 淡黄色；成人日量1-5L；pH4.8-8.0；加防 腐剂贮存 E:采集方法 采集24h尿液：8时排尿弃去，立即服药，尿 液收集容器中，次日8时最后一次收集；分段收集 F:肾功影响药物的排泄；尿药浓度与血药浓度相关性差； 婴儿尿液量难收集 3.唾液 唾药浓度与血浆游离药浓度相关，药代动力学 A:唾液和唾液腺 唾液由腮腺、舌下腺和颌下腺三腺体分泌 会集而成的，日分泌量约1.2L B:唾液的采集 漱口后15min，安静情况下，用插入漏斗的试 管接收自然流出的唾液，采集时间10min；可用物理和化学方法刺激采集 C:刺激法采集优点 缩短采集时间；减少pH （7.0）范围；药 物浓度个体差异小 D:唾液样品的制备 放置分层后，3000r/min离心10min,取上 清作为药物浓度测定样品 E:唾液采集特点 无痛、简便、经济等成为TDM的研究热点 4.组织 1）匀浆化法 A:组织检材中加入一定量的水或缓冲液，在刀片式匀浆机中 匀浆，取上清液供萃取 B:方法简便，回收率低 2）沉淀蛋白法 A:在组织匀浆中加入蛋白沉淀剂，取上清供萃取 B:方法简便，回收率低 C:常被采用，加入蛋白后上清液清澈，不乳化，杂质少 3）酸碱水解法 A:组织匀浆中加酸或碱，水浴加热，过滤或离心，上清萃取 B:适合热酸或热碱稳定的药物 4）酶水解法 A:在组织匀浆中加入酶和缓冲液，水浴，过滤或离心，取上清 液萃取 B:酶为蛋白水解酶的枯草菌溶素，可使组织溶解、药物析出 C:优点 可显著改善与蛋白结合紧密的药物的回收率；无乳化 化现象；可避免在酸和热下药物分解；采用HPLC法无需过多 净化 5