中药化学第五章-3.pptVIP

三、凝胶色谱基本构成要素 基本要素： 固定相、流动相、被分离成分的溶液。 * （一）固定相－－－多孔凝胶 1、分类　 （ 1 ）软质凝胶　　如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶等，适用于水为流动相。  （ 2 ）半硬质凝胶　如苯乙烯－二乙烯基苯交联共聚凝胶（交联聚苯乙烯凝胶）是应用最多的有机凝胶，适用于非极性有机溶剂。  （ 3 ）硬质凝胶　如多孔硅胶、多孔玻珠等，多孔硅胶是用得较多的无机凝胶。 * 2、葡聚糖凝胶的结构 　　　葡聚糖与甘油基通过醚桥并联而成的多孔网状结构。 * 3. 葡聚糖凝胶的性质 极性：葡聚糖分子内含有大量羟基 稳定性：由于醚键的不活泼性 ，不溶于水和盐溶 液，在碱性和弱酸性溶液中性质稳定 ， 但在酸性溶液中高温加热能促使糖苷键 水解。和氧化剂接触会分解，长期不用 宜加防腐剂。 * 4、葡聚糖凝胶的型号 　G－X 　G：葡聚糖凝胶 　X：1克干凝胶吸水量的10倍 　　　 不同型号的性能及应用 型号数字越大，吸水量越大，凝胶体积膨胀越大，孔隙也越大， 可用于大分子物质的分离；反之，可用于小分子物质的分离。 G型凝胶用于流动相为水的色谱分离。另外，LH型凝胶应用围更广，极性、亲水性和亲脂性流动相中均可应用。 * （二）流动相 亲脂性溶剂：氯仿、甲苯。 极性和亲水性溶剂：水、水溶液。 选用原则： 　　分离脂溶性成分，选用亲脂性溶剂为流动相。 　　分离水溶性成分，选用极性和亲水性溶剂为 流动相。 * 四、凝胶色谱类型 凝胶过滤色谱：水为流动相 （GFC）； 凝胶渗透色谱：有机溶剂为流动相(GPC) 。 * 五、凝胶色谱操作技术 凝胶的预处理 装柱 上样 洗脱 收集、检查 凝胶的再利用 * 凝胶的预处理 将干凝胶用选好的流动相（或溶剂）充分浸泡膨胀后被用。 装柱 一般选择直径为2.5 cm的柱子。凝胶装入柱中，放出溶剂，再用溶剂不断流洗柱子，使凝胶沉集、柱床稳定，并始终保持一定的液面。 上样 把需要分离的成分溶于选好的溶剂中，上样前为防止破坏柱床表面，要在 柱床表面放一张滤纸。上样方法同一般柱色谱。 洗脱 洗脱剂和浸泡凝胶所用的溶剂相同。 收集 分段收集，定性检查，合并同一组分，再进行精制。 凝胶的再利用 可反复使用，无需再生。 * * 六、应用 分离分子大小不同的化合物。 分离大分子----广泛应用。 分离小分子，或其他方面(脱盐、吸水浓缩、除热源、测定分子量)----也有应用。 * 第六节 大孔吸附树脂色谱 大孔吸附树脂色谱的概念 大孔吸附树脂色谱的原理 大孔吸附树脂色谱基本构成要素 影响分离的主要因素 大孔吸附树脂色谱的操作技术 大孔吸附树脂的应用 * 一、概念 　　吸附剂和分子筛应用的柱色谱。 二、原理 　　吸附性：范德华引力、氢键 　　分子筛性：渗透、过滤 * 三、构成要素 （一）固定相 1、分类：极性、非极性　 2、性质：大孔网状的高分子吸附剂 3、选用：根据成分的极性和分子大小 如分离大分子的物质选择能使大孔吸附树脂体积膨胀大的溶剂。反之，选用使其体积膨胀小 的溶剂。 * （二）流动相 1、种类： 2、选用原则： 　　非极性大孔吸附树脂：选择流动相极性越小，洗脱力越强。反之亦然。 一般上样后先用水（或酸、碱水）洗去杂质，然后用不同浓度的含水醇、甲醇、乙醇、丙酮等依次洗脱。 * 四、影响因素 极性大孔树脂：极性大的或分子小的成分吸附力强。 非………………：……小…………大………… * 五、操作技术 树脂的预处理：丙酮加热回流除杂质， 装柱 上样 洗脱 收集、检查 * 六、大孔吸附树脂的应用 大孔吸附树脂主要应用于中药化合物的分离和富集工作。如多糖和苷类物质的分离，黄酮苷、生物碱、三萜类化合物的分离和精制，并广泛应用于其它各个领域。 * 第七节 高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC） 近十几年来发展起来的一种快速、灵敏、高效的分离技术。 特点是： 使用的固定相支持剂颗粒很细，因而表面积很大；溶剂系统采用高压，因此洗脱速度增大。 多种类型的柱层析都可用HPLC来代替