三萜皂苷类成分的抗衰老作用与质量分析研究.pptVIP

* 2. 流动相的选择 皂苷类成分多用反相色谱柱。 常用流动相有乙腈、甲醇、纯水等。 对溶剂要求较高，最好是色谱醇。 * 四. 三萜皂苷的质量分析研究 (一) 三七中三萜皂苷的定量分析 三七为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk) F. H. Chen的干燥根。功能散瘀止血，消肿定痛。 现代药理研究证明，三七中皂甙类成分为其活性成分。为了更好地对三七药材进行质量评价和制定更完善的控制指标，采用HPLC-ELSD对其主要皂甙人参皂甙Rg1、三七皂甙R1进行了含量测定，并用紫外分光光度法测定了总皂甙的含量。 * 三七中皂甙类成分的含量测定可采用HPLC-UV及HPLC-RI法。前者用紫外检测器?=203nm检测，因三七中皂甙类成分紫外吸收较差，受试剂影响很大，基线漂移大，使分析很难进行。后者用示差检测器，则灵敏度低，稳定性和选择性均较差。本文用ELSD检测器测定三七中主要皂甙人参皂甙Rg1的含量，因ELSD检测器为质量型检测器，且不受外部环境的干扰，试剂在检测器中全部蒸发，不干扰检测，灵敏度及稳定性均符合含量测定的要求。 * A．三七中总皂苷的含量测定 1．供试品溶液的制备： 取本品粉末约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚80ml，置水浴上提取2h，弃去乙醚液，再加甲醇80ml提取4h，甲醇提取液蒸干，残渣加水15ml使溶解，水溶液置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取5次，每次15ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，定溶至50ml，作为供试品溶液。对照品溶液为人参皂甙Rg1（5mg/100ml）。 * 2．紫外吸收光谱： 仪器为岛津UV-2501pc紫外分光光度计；供试品紫外吸收曲线及最大吸收波长268nm与人参皂甙Rg1标准品完全一致 * 3．标准曲线制备： 分别精密吸取对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml置10ml量瓶中，置水浴中挥尽溶剂，取出，加浓硫酸0.6ml，摇匀，置80℃水浴中加热1h，取出，置冰浴中加95%乙醇至刻度，摇匀，在268nm波长处测定吸收度。 以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。经回归统计，得标准曲线方程：A=39.6856C+0.0148，r=0.9996。 浓度在5.04-25.20μg/ml范围内，与吸收度呈线性关系。 * 4．方法学考察： 回收率试验回收率为101.15%，RSD=1.44%；稳定性试验RSD为1.35%，总皂甙在3h内稳定；精密度试验RSD为1.23%；重现性试验RSD为2.56%。 * 表1 三七中总皂甙的含量测定 序号 产地 总皂甙（%） RSD（%） 1 云南文山（40头） 7.25 1.57 2 云南文山（90头） 6.81 3.02 3 云南文山（270头） 6.70 2.70 4 广西靖西（40头） 6.44 2.02 5 广西靖西（60头） 5.58 1.81 6 西安（60头） 9.08 1.34 7 杭州（80头） 7.80 2.56 * B．HPLC-ELSD测定三七中三七皂甙R1、人参皂甙Rg1的含量 1．色谱条件： 日本岛津LC-10A；法国SEDEX55型蒸发激光散射检测器（ELSD）；杭州英谱HS色谱数据工作站。色谱柱日本岛津Shim-packCLC-ODS柱（6.0mm×150mm）；流动相乙腈-水（30：70）；柱温45℃；流速0.5ml/min；ELSD 检测器漂移管温度90℃；载气压力0.20mPa。在此条件下，样品中三七皂甙R1、人参皂甙Rg1与其他相关峰均能达到基线分离。 2．样品制备： 同紫外分光光度法项下。 * * 3．标准曲线制备： 分别精密吸取对照品溶液（三七皂甙R1、人参皂甙Rg1的1mg/ml 甲醇）1，2，3，4，5，6μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面