鸡新城疫病毒荧光双链引物实时荧光PCR检测方法的研究.pdfVIP

第 27 卷第 4 期 家畜生态学报 Vol . 27 No . 4 2006 年 7 月 Act a Ecolo giae A nimali s Do ma stici J uly . 2006 鸡新城疫病毒荧光双链引物实时 荧光 PCR 检测方法的研究 1 2 2 1 李 　军 ,吴时友 ,尹燕博 ,牛钟相 ( 1. 山东农业大学动物科技学院 ,山东 泰安 　27 10 18 ;2 . 山东澳兰生物工程研究院 , 山东 青岛　2665 15) [摘 　要] 　根据鸡新城疫 F 糖蛋白的保守基因序列 ,设计一对正引物 。根据正引物设计一对 与之相互补的负引物 。正引物的 5 ’端标记 FA M ,负引物的 3 ’标记淬灭剂 DABC YL 。反应体 系中进行引物杂交后 , 由于正 、负引物完全互补 ,FA M 产生的荧光被标记在负引物上的DAB C YL 淬灭掉 。然后利用杂交后生成的荧光双引物对鸡新城疫及 A IV 、IL TV 、IBV 四种病毒和 M G 进行了实时荧光 PCR 检测 。结果表明 ,只有以鸡新城疫标准毒株的克隆质粒为模板的管 中能够检测到荧光信号 ,其他管中没有信号产生 。该方法特异性强 ,灵敏度高 ,重复性好 ,在鸡 新城疫临床诊断和出入境检疫中有着广阔的应用前景 。 [ 关键词] 　鸡新城疫 ;荧光双链引物 ;克隆 [ 中图分类号] 　S811. 5 　 　　　　　[文献标识码] 　A 　　 [文章编号] (2006) ( ( 　　鸡新城疫是由新城疫病毒 N ewca st le Di sea se 行检测 , 同时利用禽流感病毒 A vian Influenza vi Vir u s ,NDV) 引起的一种 以呼吸道 、消化道粘膜出 ) ( r u s ,A IV 、传染性喉气管炎病毒 Inf ectiou s L aryn 血为典型病变的高度接触性 、急性败血性禽类传染 got racheiti s vir u s , IL TV ) 、传染性支气管炎病毒 病 , 是危害世界养禽业的最严重的传染病之一 , 同 ( ) ( Inectiou s Bronchiti s vir u s ,IBV 和 鸡支原体 My ( ) 时也是世界动物卫生组织 O IE 规定的家禽 A 类传 ) cop la sm Gallinar um ,M G 做对照 ,从而建立了一种 染病之一 。NDV 属于副粘病毒科 ,副粘病毒亚科 ,