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水牛-猪异种体细胞核移植中 甲基转移酶的作用 摘 要 核移植（Nuclear Transfer ，NT ）是一种研究细胞全能性时所需要用到 一种重要的手段，本研究利用水牛的供体细胞作为 NT 的核供体，猪的卵母 细胞作为核受体，进行了异种体细胞核移植（intersperse Somatic Cell Nuclear Transfer，iSCNT ），从 iSCNT 的角度来探讨水牛的甲基转移酶在重编程时 候的作用。 我们首先对所获得的水牛成纤维细胞系进行了核型分析，发现所获得 的细胞系体细胞共有染色体24 对 48 条染色体，与水牛的核型相符。利用 这株细胞系，我们进行了 iSCNT 。并获得了囊胚。我们首先对iSCNT 形成 的胚胎进行了鉴定。首先是利用转染了GFP 的水牛成纤维细胞注入猪的卵 母细胞中，发现后期形成的胚胎可以发出绿色荧光。其次，我们优化了的 iSCNT 的胚胎培养体系，结果发现 PZM-3 是最合适培养 iSCNT 胚胎的培养 液（3.88% vs 0% ）。而且，我们对比了iSCNT、猪同种核移植（SCNT ）和 孤雌激活（Parthenogenetic Activation ，PA ）胚胎的发育潜能，发现，在分 裂率上，iSCNT 与 SCNT 相比具有显著差异（77.19% vs 46.81% ），而与PA 相比没有显著差异（77.19% vs 66.29% ）。而在囊胚率上，与 SCNT 相比有 显著差异，与 PA 相比具有极显著差异。 最后，我们利用 5’-Azacytidine，一种广普型的甲基转移酶（Dnmt ）抑 制剂，对 iSCNT 的供体细胞的Dnmt 进行了抑制，并通过 qRT-PCR 检测了     Dnmt1a 和 Dnmt3a 的表达，发现其 RNA 表达丰度相对于未经过处理的细胞 要低。利用这些经过处理的供体细胞进行核移植，结果发现，经过 5’-Azacytidine 抑制后，异种克隆的囊胚率下降了，但是与对照组的差异并 不显著。我们的结果表明，供体细胞的 Dnmt 在水牛-猪异种克隆的重编程 过程中的去甲基化不起重要作用。   关键词：水牛 猪 异种核移植 胚胎 甲基转移酶     DNA METHYLTRANSFERASE IN BUFFALO-PORCINE INTERSPECIES SOMATIC CELL NUCLEAR TRANSFER REPROGRAMMING ABSTRACT Nuclear transfer （NT ） is a crucial methods in studying cell reprogramming. In our research, we use the buffalo fibroblast as the donor cells ，porcine oocytes as the receptor for interspecies somatic cell nuclear transfer (iSCNT). And study the function of DNA methyltransferase (Dnmt) in iSCNT. We firstly analysis the karyotype of the cell lines from buffalo fetal. As a result, the cell lines we obtained had 48 chromosomes. This consistent with the karyotype of buffalo. We then transfected this cell li