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钙离子检测 钙离子检测 - Calcium Indicators - - Calcium Indicators - 钙离子  信号转导是活细胞所执行的重要生物功能之一。  细胞外的信号通常是通过各种各样的化学刺激来传递到细胞内部的。活细 胞的表面有多种多样的受体，而信号正是通过这些受体的活化来传递到细 胞内部，然后信号转变为另外一种形式的信息以引起相应的细胞应答。  第二信使在细胞内的信号转导中起到非常重要的作用，它主要是通过离子 浓度的变化来传递信息的。  因此能够监控细胞内的离子浓度对研究第二信使以及胞内信号转导的研究 具有极为重要的意义。 钙离子荧光指示剂 2 理想的测定胞内游离「Ca +」的Ca2+荧光试剂，除了应能无损伤的导入细胞、对 细胞无毒性作用、与Ca2+反应迅速、测定灵敏度高、选择性好、线性范围宽外，还 应该具有以下特性： ⑴ 可在长波段激发，以避免紫外光激发而引起的细胞自身荧光的干扰 和对细胞的光损伤。（例如Fluo 3、Fluo 4和Rhod 2等） ⑵ 试剂与钙离子结合前后荧光峰有较大位移，便于采用双波长比率法 进行测定，以消除由于试剂绝对浓度、仪器效率等因素的微小变化 造成的误差。（例如Fura 2和Indo 1等） ⑶ Kd大小适宜，适当低亲和力，以满足相应细胞受刺激后瞬时钙离子浓 度升高变化的要求。（例如Fluo 3、Fura 2和Indo 1等） ⑷ 进入胞浆而无分室化效应。 ⑸ 水溶性好，在细胞中迅速扩散并水解等性能。 钙离子探针简史 2 1982年，美籍华裔科学家、加利福尼亚大学的Tsien R Y等合成了第一代钙荧光指示剂，使测定活细胞内 Ca 的方法取 2 2 得了突破性的进展．之后他们又相继合成了第二代和第三代Ca 荧光指示剂，使对活细胞内[Ca ]I的无损分析成为可能。 第一代钙荧光指示剂 第一代钙荧光指示剂有8种，其中Quin-2的性能较佳。其对钙的亲合力较高，适于静态细胞钙 的测定，但不可用于测定高浓度的细胞钙．另外，Quin一2的激发波长较短，光稳定性较差． 第二代钙荧光指示剂 第二代钙荧光指示剂有6种，但也只有Fura-2和Indo-1性能较佳．试剂与Ca2结合后荧光峰有 位移，故可采用双波长比率法进行测定。此法有效地减少由于试剂的绝对浓度、光程长或仪 器的绝对灵敏度、光漂白效应、指示剂泄漏、以及细胞厚度、细胞内荧光指示剂非均匀分布 等测量条件的任何微小变化对游离Ca2测定造成的误差，准确度较高，但其缺点是在某些类型 细胞中不能完全水解，有时还会有区域化现象发生． 第三代钙荧光指示剂 第三代钙荧光指示剂有5种，其中以Fluo-3性能为佳．Fluo-3的最突出的优点是激发波长位于 可见光区，有效地避免了第一、二代钙荧光指示剂由于紫外光激发而引起的细胞自发荧光的 干扰和对细胞的损伤．但Fluo-3与Ca2 结合后荧光峰不位移，故不可采用双波长比率法进行 测定． 钙离子检测 - Calcium Indicators -  钙离子指示剂的原理及其特性  钙离子试剂的使用方法，注意事项，以及常见问题  钙离子试剂的应用实例 钙离子指示剂的原理及其特性 钙离子指示剂的作用原理 钙离子指示剂的作用原理 -