高容量血液滤过对严重脓毒症患者微小RNA-146a及炎症介质的影响.pdfVIP

中华危重病急救医学2014 年4 月第26 卷第4 期 Chin Crit care Med.April 2014. Vol.26.No.4 • 277 • ·研究报告· 高容量血液滤过对严重版毒症患者 微小RNA -146a 及炎症介质的影响 茅尧生李智鑫吕铁 铀抗凝，用单个核细胞提取液分离出单核细胞，与含 1 0%胎 机体免疫失衡f!P促炎反应与抗炎反应失衡，是导致隙毒 孵箱 症发生的重要机制之一It41 ，无论是过度炎症反应还是过度免 牛血清的 RPMI I640 培养液混匀后置于37 c、5%C0 2 中培养 2 h. 收集贴壁细胞备用，锥虫蓝染色证实95%以上为 疫抑制都会给机体造成严重损害.治疗上强制性地抑制任何 一方都是不可取的，有可能导致原有的失衡加剧或是引起另 活细胞，CDJ4 证实85%以上为单核细胞，备检。 1.3.2 外周血炎症细胞因子测定:采用酶联免疫吸附试验 一种免疫失衡;所以维持或者重建机体免疫内稳状态被认为 是治疗服毒症的有效方法之一[-51。 实践证明，高容量血液滤 (EUSA)检测血消肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介萦 过(HVHF)对旅毒症有很好的疗效，且越早介入越好[ 6-71 。 深 (IL-l 、 IL-IO)等细胞因子水平，按试剂盒(武仅博士德生物有 入研究发现.HVHF 对机体免疫的修复和调节正是其起到良 限公司)说明书操作。 好疗效的关键因素之一[5.8J。本研究以 HVHF对严重除毒症患 1.3.3 外周血单核细胞miR-I46a 表达测定:提取总 RNA: 者微小RNA-146a(miR-I46a)的影响为切人点，试图进一步 5x 逆转录缓冲液2μL.RNA 酶抑制剂0.5μL， dNTP 棍合物 陶明 HVHF对重建机体免疫内稳状态的可能作用机制。 1μL ， AMV 逆转录酶0.5 μL.miR-J46a 逆转录引物 0.5μL. 1 对象与方法 模板RNA3μL，去 RNA 酶水2.5μL; 总体积 10μL，于聚合 1.1 研究对象的纳入与排除:采用前瞻性对照研究方法，选 酶链反应(PCR)仪45 c 45 min ,95 c 5 min ，冰浴 5 mino 将 择2011 年6 月至2013 年3 月人住绍兴市人民医院重症医 合成的 cDNA 置于-20 c保存备用。 2x 荧光染料(SYBR Green mix )25 μL， PCR 正向引物 lμL ， PCR 反向引物 l μL， 学科严重在毒症患者ω例，均符合2∞1 年华盛顿国际版毒 症会议诊断标准19J 。 排除标准:年龄80岁;纽约心脏病协会 cDNA 模板 4 μL ， DNA 拓扑