低剂量LPS激活NF-κB促进胰岛β细胞株NIT-1增殖.pdfVIP

· 1430 · 中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2009Nov；25(11)：1430—3 低剂量 LPS激活NF-KB促进胰岛 I3}细胞株NIT-1增殖 刘珊英 ，李 焱 ，梁绮君 ，甘小玲 ，梁 颖 ，梁蔚文 ，‘林燕华 ，林天歆 (中山大学附属第二医院 1．林百欣医学研究中心、2．内分泌科，广东广州 510120) 中国图书分类号：R-332；R322．57；R329．24；R587．022； 胰岛31细胞增生产生影响 目前 尚未见报道。 R977．6 LPS是存在于革兰阴性细菌外膜 的一种内毒 文献标识码：A 文章编号：1001—1978(2009)11—1430—04 素。LPS作为 toll样受 体 4(toll—likereceptor4， 摘要：目的 探讨脂多糖 (1ipopolysaccharide，LPS)对小 鼠胰 TLR4)的配体已在多种细胞证明参与调节细胞生长 岛B细胞增殖的影响及NF一-cB信号途径的调节作用。方法 并激活NF—KB，而部分研究发现激活NF—KB可拮抗 不同剂量 LPS按不同时间刺激小 鼠胰岛B细胞株NIT一1 13细胞的凋亡 J。本课题组早期研究已发现小鼠胰 细胞，并使用 NF—KB特异性抑制剂 Bayl1-7082(5p~mol· 岛B细胞株 NIT．1存在 TLR4蛋 白表达，本研究进 L )进行干预。使用 cellcountingkit一8(CCK一8)试剂检测细 一 步证实LPS可能通过激活 NF—KB信号途径调节 胞增殖 ，Westernblot检测 NIT一1细胞磷酸化 I-KB (pl—KBo)【 NIT一1细胞的生长。 和总I-KBct蛋 白水平 。结果 LPS在 0．1、0．5、1．0、5．0mg · L 刺激72h对NIT1细胞增殖有促进作用，在 5．0mg· 1 材料与方法 L 浓度时促进作用减弱，在 10．0mg·L 浓度时对NIT一1 1．1 细胞培养 NIT．1细胞是源 自转基因小 鼠的 细胞增殖无明显影响；NF—KB特异性抑制剂 Bayl1—7082可 胰岛B细胞系。本实验室所用NIT．1细胞由北京解 阻断LPS对NIT一1细胞增殖的促进作用；LPS刺激后60～ 放军总医院母义明教授惠赠。将 NIT-1细胞培养于 120rain，NIT一1细胞磷酸化 I-KBd相对于总 I-KBo【蛋 白水平 含 10％胎牛血清的HamsF12K培养基，37~C、5％ 增高；BaylI-7082阻断LPS诱导的NIT—i细胞 I-KB 蛋白磷 CO，环境中生长。取对数生长期细胞用于实验。 酸化。结论 低剂量 LPS促进 NIT一1细胞增殖，NF—KB激活 1．2 LPS对 NIT-1细胞增殖的作用 NIT．1细胞 可能参与其过程。 按2000或5000cells·well。。接种于96孔板，37℃、 5％CO，培养24h后进行干预。实验 1：① 正常对 关键词：脂多糖；核因子一KB；KB抑制物；Bayl1—7082；胰岛 B 照组；② LPS(购 自Sigma)不同浓度处理组，分别含 细胞；NIT．1 LPS0．1、0．5、1．0、5．0、10．0mg·L一，孵育72h进 行检测。实验 2：以LPS(1．0mg ·L )分别