重组CHO细胞培养过程中氨对细胞代谢的影响.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’() * ! +( * # 年 月 $%%! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 ,-. $%%! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 重组 !# 细胞培养过程中氨对细胞代谢的影响 孙祥明 张元兴 （华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 上海 $%%$# ） 摘 要 研究了重组 BCD 细胞批培养过程中，氨浓度对细胞的葡萄糖、谷氨酰胺及其它氨基酸代谢的影响。表 明，细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的得率系数随着氨浓度的增加而降低，起始氨浓度为 E4499()F G 的批培养过程与起 始氨浓度为% E$!99()F G 的批培养过程相比，细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的得率系数分别下降了3H 和5 H ，细胞对 其它氨基酸的得率系数也分别下降了% H I % H 。氨浓度的增加明显地改变了细胞的代谢途径，葡萄糖代谢更倾 向于厌氧的乳酸生成。在谷氨酰胺的代谢过程中，谷氨酸经谷氨酸脱氢酶进一步生成 /酮戊二酸的过程受到了氨 ! 的抑制，而氨对谷氨酸经谷氨酸转氨酶反应生成 /酮戊二酸的过程有促进作用，但总体上谷氨酸进一步脱氨生成 ! /酮戊二酸的反应受到了氨的限制。 ! 关键词 动物细胞培养，代谢， 细胞，葡萄糖，谷氨酰胺，氨 BCD 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） J0# K !%%%/#%4! $%%! %#/%#%5/%4 促红细胞生成素（ ）是治疗肾衰性和癌症化 8LD $ 材料与方法 疗引起的贫血的有效药物，也可用于择期手术的自 身输血血液储备，具有广阔的市场前景。利用重组 $% $ 实验材料 BCD 细胞培养生产的重组人 8LD 已经获准上市。 表达人促红细胞生成素的重组 BCD 细胞， 提高8LD 生产率的主要途径是实现细胞培养的高 BCD/M8C/$，由山东东阿阿胶股份有限公司提供，培 密度和提高细胞的产物表达能力。灌注培养是实现 养基为 与 的 混合物，并添加 （ M,8, 6!$ ! N ! H 3F ［］ 细胞高密度培养的有效选择! 。细胞培养的高密度 3）的胎牛血清，培养基及血清均购自O:PA( 公司 有赖于过程控制的优化，即维持适当的营养物浓度 （ ）。 QRK 不至于导致细胞生长的营养限制，控制低的代谢副 $ ’ 细胞培养 产物浓度，避免其对细胞生长的抑制。 从细胞库中取出重组 BCD 细胞种子，在9G 氨和乳酸是细胞培养过程中的主要代谢副产 的方瓶中加入 !%9G 培养基进行复苏培养，细胞长 ［，］ 物$ # 。与乳酸相比，较低浓度的氨就会对细胞的生 满单层后，