基因工程的基本操作程序11v.pptVIP

人教版选修3;一、回顾旧知;基因工程;目的基因;知识点一：1.原核细胞的基因结构;补：原核细胞的基因结构;①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。;;真核细胞的 基因结构;;;基因表达的计算;1、目的基因的获取;一、目的基因的获取;一、目的基因的获取;提取某种生物的全部DNA;提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA;;① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ;利用PCR技术扩增目的基因;PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增;⑥ 过程：;思考？;;(二)利用PCR技术扩增目的基因;PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增;PCR技术扩增与DNA复制的比较;目的基因的mRNA;二、基因表达载体的构建——基因工程的核心;2、表达载体的组成 1）启动子 2）终止子 3）目的基因 4）标记基因等; 用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。;质粒;①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。;三、将目的基因导入受体细胞;（二）方法;1、将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点：;③过程：; 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。;（3）花粉通道法;胚珠;2.将目的基因导入动物细胞;（2）操作程序:;常用法：Ca2+处理;;四、目的基因的检测与鉴定;（一）、检测;;DNA分子杂交示意图 ;2、检测目的基因是否转录出了mRNA;;提示： ①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再与同位素标记的DNA探针杂交； ②抗原－抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的。;若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。;;归纳步骤;四、目的基因的检测与鉴定;归纳: 基因工程的基本操作程序;知识点一：1.原核细胞的基因结构;补：原核细胞的基因结构;①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。;;真核细胞的 基因结构;;;基因表达的计算