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实验五 高效液相色谱分析演示实验
一 实验目的
熟悉高效液相色谱仪的仪器系统组成、工作原理以及工作流程。
通过实验演示过程,熟悉掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。
了解高效液相色谱仪在材料科学中的用途
二 实验原理
高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法,其仪器系统构成主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。其工作流程如图1所示。
由于高效液相色谱仪具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用以及流出组分易收集等优点,因而已被广泛应用到材料科学、环境分析、无机分析、食品分析、医药研究等多种领域。
三、仪器与试剂
1.仪器:1)P230液相色谱仪(大连依利特公司) ;2)微量注射器、容量瓶
2.试剂:甲醇(色谱纯)、二次蒸馏水、苯
四、实验步骤
1.配制标准溶液:以二次蒸馏水为溶剂,于容量瓶中配制一定浓度的苯标准溶液。
2.依次开启电脑、动力泵、检测器以及色谱数据工作站,预热20分钟。
3.打开EC2000 色谱数据处理系统,进行色谱实验参数的设置,进入样品采集状态。
4.用25ul微量注射器准确抽取25.0 μL苯标准溶液,注射入进样口。转动平面六通阀,从load状态转入injection状态。
5.通过色谱数据处理软件注意观察苯色谱峰的产生。
五、思考题
1.高效液相色谱仪主要由哪些部件组成,各部件的主要作用是什么?
图1 液相色谱仪工作原理图
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