实验7教案-长沙医学院.doc

长 沙 医 学 院 教 案 课程名称 分子生物学 授课题目（章节或主题） 感受态细胞的制备和转化 授课教师 陈珂珂 所属系（部） 基础系 所属教研室 生物教研室 职称 助教 授课时间 年 月 日 第 周 星期 第 节 第二次课 授课时数 8学时 授课班级 生物技术专业（本科√ 专科□） 级 1班 教学课型 理论课□ 实验课√ 见习课□ 习题课□ 讨论课□ 其它□ 教材名称、作者、出版社及出版时间 分子生物学及基因工程实验教程、刘箭、科学出版社、2012 教学目的要求： 了解大肠杆菌感受态细胞的制备原理及转化反应的目的，应用范围及操作过程，掌握重组DNA 质粒转化大肠杆菌的操作技术。 重点与难点： 重点：掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的操作技术； 难点：大肠杆菌感受态细胞的制备及转化； 教学方法（请打√选择）： 讲授法√ 讨论法□ 启发式□ 自学辅导法□ 练习法(习题或操作) √ 读书指导法□ ＰＢＬ（以问题为中心的教学法）□ 其他□ 教学手段（请打√选择）： 板书√ 实物√ 标本√ 挂图□ 模型□ 投影□ 幻灯□ 录像□ CAI（计算机辅助教学）□ 教学过程设计和教学内容： 感受态大肠杆菌的制备及转化 【实验目的】 通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法和技术。 【实验原理】 细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。转化是指质粒或以它为载体构建的 重组子导入细菌的过程。细菌处于0°C，CaCl2低渗溶液中，细胞膨胀成球形，外源DNA 附着于细胞表面，经42°C短时间热击处理，促进细胞吸收DNA复合物。将细胞放置在 非选择性培养基中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新表型如Ap+得到表达，然后将此细菌培养物涂在选择性培养基上进行培养，从而获得转化。 【仪器、材料、试剂】 (一) 仪器 1． 超净工作台 2． 分光光度计 3． 高速冷冻离心机 4． 台式离心机 5． 恒温摇床 6． 生化培养箱 7． 电热恒温水浴锅 8． -70℃冰箱 9． 恒温箱 （二） 材料 1． 大肠杆菌TOP 10菌株: 2． 质粒pxST 3． 胰蛋白胨 4． 酵母提取物 5． 氯化钠（NaCl） 6． 氨苄青霉素 7． 氯化钙（CaCl2） 8． 501mL离心管 9． 吸头、小指管 、试管、培养皿、锥形瓶 (三) 试剂 1. 0.1mol/L CaCl2溶液 2. LB液体培养基 配制每升培养基，应在配制每升培养基，应在4℃放置12h后加终浓度为15%的无菌甘油，按μl分装，-80保存备用。 时间分配 复习思考及作业题布置 如何筛选转化子？ 制备感受态细胞的原理是什么？ 如果实验中对照组本不该长出菌落的平板上长出了一些菌落，你将如何解释这种想象？ 授课的创新点： 参考资料（包括辅助教材、参考书、文献等）： 教研室意见： 教研室主任签章： 年　　月　　日 课后记（即通过收集教学督导专家、同行和学生的反馈信息，认真整理分析成功的经验和不足之处，在课程结束后填写）