第四篇 人工染色体载体.pdf

4章 人工染色体载体 黏粒载体 酵母人工染色体载体 细菌人工染色体载体 P1噬菌体载体和P1人工染色体载体 4-1 5种常见高容量克隆载体及其基本特性 载体 容量（kb） 复制子 宿主 拷贝数 重组DNA导入 选标记 克隆DNA 宿主的方式 获取方法 黏粒 30-45 ColE1 大肠杆菌 高 转导 碱抽提 P1 70-100 P1 大肠杆菌 1 转导 sacB PAC 130-150 P1 大肠杆菌 1 电转化 sacB BAC 120-300 F 大肠杆菌 1 电转化 α-互补 YAC 250-400 ARS 酵母菌 1 转化 ade2 脉冲场电 泳 1 4.1 黏粒载体 4.1.1 黏粒的结构特征和用途 o 黏粒（cosmid）是质粒的衍生物，是带有cos序 列的质粒。cos序列是噬菌体DNA中将DNA包装 到噬菌体颗粒中所需的DNA序列。 o 黏粒的组成包括质粒复制起点（ColE1）、抗性 标记（ampr）、cos位点，因而能像质粒一样转 化和增殖。 o 它的大小一般5-7kb左右，用来克隆大片段 DNA，克隆的最大DNA片段可达45kb。 4.1.2 黏粒载体的 工作原理 图4-1 黏粒载体 克隆 DNA的 一般原 理和步 骤 2 4.1.3 黏粒克隆载体 1．黏粒pJB8 o 大小为5.4kb，由 r amp ，ColE1复制 起点（ori）， cos位点，多克隆 位点组成，可容 纳33-46.5kb外源 DNA片段，主要用 来在细菌中克隆 真核DNA。 2．含双cos位点的黏粒载体 o c2RB和 Supercos-1是 双cos位点的 黏粒载体， c2RB大小为 6.8kb， 两个 cos位点，在 cos位点之间有 r Kan （图4-3）。 o 装载容量33- 46.5kb 图4-3 黏粒载体c2RB图谱 3 图4-4 Supercos-1克隆 的原理和步骤 o Supercos-1 大小为 7.94kb， 有在真核细 胞中起作用 的来自猿猴 病毒SV40的 复制起点 ori-SV40和 新霉素抗性 基因 （neor）。 4 4.1.4 黏粒的优缺点 （1）同时具有λ噬菌体和质粒载体的特性 （2）具有高容量的克隆能力 柯斯质粒的缺点 o 两个粘粒之间，当存在同源序列时，可能会发生 重组，结果使克隆的外源DNA片段重排或丢失。 o 含不同重组DNA的菌落生长速度不一。当柯斯质 粒文库复制扩增时，由于不同的插入片段对宿主 细胞作用的