实验九 蛙心搏、期外收缩和蛙类离心脏灌流实验报告.doc

华南师范大学实验报告 实验题目： 蛙心搏的观察与描记、期外收缩与代偿间歇和蛙类离体心脏灌流 实验仪器与材料： 蛙3只；常规手术器械、蛙板、蛙心夹、毁髓针等；秒表（手机秒表）、两个针头（针灸针）、双针形露丝刺激电极、张力换能器、支架、滑轮、双凹夹、PowerLab生理实验系统、蛙心插管（斯氏套管）、套管夹 药剂：0.65%NaCl溶液，5%NaCl溶液，2%CaCl2溶液，1%KCl溶液，1:5000肾上腺素，1:10000乙酰胆碱溶液，300U/ml肝素溶液 实验方法： (一）蛙的心搏观察 双毁髓，暴露蛙心脏：小心剪去心包膜。 观察蛙心脏结构 观察心搏过程，记录正常心跳次数 斯氏第一结扎，观察记录静脉窦、心房和心室 斯氏第二结扎，观察记录静脉窦、心房和心室 重复步骤1制备另一个蛙心暴露，用于下面的心搏曲线实验 （二）蛙的心搏曲线与心电图记录 连接实验装置：PowerLab刺激输出线接双针形刺激电极，张力换能器接通道2，通道3生物电输入线接针形电极 用蛙心夹轻夹心尖连接张力换能器，可用滑轮，棉线适当延长点，角度放低 开机，打开chart软件，分别设置ch2和ch3放大参数，设置刺激为单脉冲。 针形电极插入蛙上下肢皮肤，连接通道3 观察正常的蛙心搏曲线和心电图记录。 （三）期外收缩与代偿间歇实验 在方法二的基础上，将刺激电极放到心室部位，注意尽量不影响心脏的收缩舒张 分别在心室的收缩期，舒张早期、中期和晚期给予适当强度单脉冲（阈上刺激），观察期外收缩和代偿间歇的发生。 保存数据 进入方法四，制备蛙的离体心脏灌流装置 蛙离体心脏灌流装置 双毁髓，暴露蛙的心脏，分辨连接蛙心脏的血管：动脉圆锥、左主动脉和右主动脉，静脉与静脉窦 斯氏蛙心插管法：在左主动脉下穿线，离左右主动脉分支处（近动脉圆锥）2mm结扎左主动脉，在左右主动脉下再穿一线打活结备用，准备好蛙心套管（任氏液+1滴肝素溶液），在左主动脉的分支上部位剪一小斜口，将套管插入心室（收缩期），当看到血液冲进套管，液面上下移动，即可结扎动脉和套管。 离体心脏灌流实验项目 记录正常心搏曲线，准备好加药标记，以下实验过程中保持chart连续不停的记录 滴加0.65%NaCl溶液并标记，观察到心搏明显变化后，吸去套管内溶液并同时做冲洗标记，用新鲜的任氏液清洗2~3次，待心搏曲线恢复正常。注意，换液时切勿碰套管，保持灌流液面一致。（以下实验同）。保持Chart连续采样直到实验结束。 滴加5%NaCl2~6滴。 滴加2%CaCl2溶液1~3滴实验 滴加1%KCl溶液1~2滴实验 滴加1~2滴肾上腺素溶液（1:5000）实验 滴加1~2滴 1:10000乙酰胆碱溶液实验 实验结束，保存数据，回放记录，卸下实验装置，清理仪器、桌面卫生，并关PowerLab和电脑电源 实验结果： 蛙的心搏观察 从心脏的腹面可看到一个心室，其上方有两个：心房，房室之间有房室沟。心室右上方有一动脉圆锥，是动脉根部的膨大，动脉干向上分成左右两分支用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉，轻轻提起蛙心夹，将心脏倒吊，可以看到心脏背面有节律搏动的静脉窦。在心房与静脉窦之间有一条白色半月形界线，称为窦房沟。前、后腔静脉与左、右肝静脉的血液流人静脉窦。 记录正常水平下，静脉窦、心房和心室的跳动频率如表一 表一 斯氏结扎记录表 静脉窦 心房 心室 52 52 50 第一结扎 47 41 41 第二结扎 42 39 32 由图二可观察到在舒张早期以后，对心室给予一次刺激，使心室在正常窦房结的冲动到达之前，因额外的刺激引起一次提前收缩，即期前收缩。 心室在期前收缩之后出现较长的舒张时间，称为代偿间歇 当任氏液中加入Na+后，蛙的心搏曲线的基线明显下降，说明Na+对蛙类心脏的收缩性起抑制作用，使心脏的收缩力降低。 图四 滴加2%CaCl2溶液后蛙的心搏曲线图 图五 滴加2%CaCl2溶液后加入新鲜的任氏液后蛙的心搏曲线图 由图四、五，可观察到当任氏液中加入Ca2+后，心搏曲线的基线上移。当加入新鲜的任氏液后蛙的心搏曲线图渐渐恢复正常，心搏曲线基线逐渐下移恢复正常水平。 图六 滴加1%KCl溶液溶液后蛙的心搏曲线图 如图六所示，当任氏液中加入K+后，蛙的心搏曲线呈下降趋势，说明K+对蛙类心脏的收缩性起抑制作用，使心脏的收缩力降低。同时心搏曲线由密变疏，说明心率减慢。当加入新鲜的任氏液后蛙的心搏曲线图渐渐恢复正常，心搏曲线基线逐渐下移恢复正常水平。 分析与讨论 蛙的心搏观察 斯氏第一结扎后，房室搏动都减慢原因在于斯氏结扎第一次是分离静脉窦与心脏之间的传递，心脏的自律性完全靠静脉窦来提供，如果截断静脉窦与心脏之间的传递，因为静脉窦对异位起博点有抑制作用，则心脏会停止跳动一段时间，而后异位起博点开始起跳，应该是房室交界处开始搏动，因为房室交界的