力复霉素产生菌地中海拟无枝菌酸菌U32丙氨酸脱氢酶基因克隆和表达.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 %’ (! - (# 年 月 #$$ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+,’ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 力复霉素产生菌地中海拟无枝菌酸菌!# 丙氨酸脱氢酶基因克隆及表达 姚玉峰 卢 捷 俞 浩 赵国屏 姜卫红 焦瑞身 （中国科学院上海植物生理生态研究所微生物次生代谢分子调控研究实验室 上海#$$$# ） 摘 要：丙氨酸脱氢酶（ ）可逆催化丙氨酸脱氨生成丙酮酸和 。它是生物体 1@ .A! A .A . -)BC 内的氨基酸代谢和氨同化途径的关键酶。在地中海拟无枝菌酸菌（ ） !#$%’(%)*+* ,-+(,..’/,+ D# 中，丙氨酸脱氢酶的活力与力复霉素的生物合成有负相关现象，其活力受E-F 全局效应 的调控。根据结核分枝杆菌（ ）和天蓝链霉菌（ ）的 0#$%1’$(,.+2 (21,.$2%*+* 3(.,)(%#$,* $%,+$%%. 丙氨酸脱氢酶氨基酸的保守序列和地中海拟无枝菌酸菌D# 对氨基酸密码子的使用偏好，设 计一对简并G@H 引物。以此引物从地中海拟无枝菌酸菌D# 中扩增到一???I* 的片段，并以 此片段为探针从地中海拟无枝菌酸菌D# 基因组;:3,J 文库中成功的克隆到了丙氨酸脱氢 酶结构基因（ ）。它编码了一个 个氨基酸的蛋白质，基因的 含量为 ，符合链 ’- =. K@ =# A? L 霉菌的基因结构特征。在起始密码子的上游0 个碱基处，有一典型的链霉菌核糖体结合位点 （ ）： ，第 位的氨基酸为赖氨酸，是丙酮酸结合位点。以 为载体，在 HMN )KK)KK =? *1O#I 4 ( （ ）中高效表达了 基因。用 在 时诱导得到的丙氨酸脱氢酶活力最 $%+ MP#. B1 ’- QGOK ##R 高。用C,:2O48 柱纯化了表达的丙氨酸脱氢酶。酶学性质研究表明该酶专一性以P2)’4 和 （）为底物。 -)B C 关键词：地中海拟无枝菌酸菌，丙氨酸脱氢酶，克隆，表达 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） S/ ) $$$.20.=/ #$$ $#2$#$02$ ［］ U . 丙氨酸脱氢酶（