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北京雷根生物技术有限公司 通用细胞裂解液 产品简介 ： 多种成分均可以从细胞中提取总蛋白 ，例如去Triton、SDS、NP-40 等。通用细胞裂 解液(Common Lysis Buffer )，是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞 ，并获得总蛋白的 裂 解 液 。 所 获 得 的 蛋 白 质 可 以 用 于 PAGE 电 泳 ， Western ， 免 疫 沉 淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，主要由 Tris、Triton X-100 等组成 ，并含有多 种蛋白酶抑制剂成分 ，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。 用 Common Lysis Buffer 得到的蛋白 ，可以用leagene BCA 蛋白浓度测定试剂盒 (PT0001)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质 ，不宜用Bradford 法测定由通用细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。 产品组成 ： 编号 PS0008 PS0008 Storage 名称 Common Lysis Buffer 100ml 500ml -20℃ 使用说明书 1 份 主 要 成 分 ：主 要 由 Tris-HCl 、 NaCl 、 低 浓 度 Triton X-100 ， 低 浓 度 sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA 等多种蛋白酶抑制剂组成。 自备材料 ： 1、高速离心机 2、微量移液器 3、 PMSF，亦可采购 Leagene 的苯甲基磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L)(PI0011) 操作步骤 （仅供参考）： (一)贴壁培养细胞 1、取 Leagene Common Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后 ，使用前取适当量的裂解液 加入 PMSF，使其最终浓度为 1mM。 2、去除贴壁细胞的培养液 ，用 PBS、NS 或无血清培养液清洗 1 次，低速离心 ，弃上清， 留取沉淀。 3、按照 6 孔板每 1 孔加入 100～200μl 含有 PMSF 的裂解液的比例 ， 加入Common Lysis Buffer。移液器轻轻吹打 ，使裂解液和细胞充分接触。冰上或 4℃裂解 30～60min。 4、 10000～12000g，4℃离心 10～15min(如无低温离心机 ，室温下离心亦可)，取上清。 北京雷根生物技术有限公司 5、进行后续的 SDS、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 (二) 悬浮培养细胞 1、取 Common Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后 ，使用前取适当量的裂解液加入PMSF， 使其最终浓度为 1mM。 2、低速离心悬浮细胞 ，一般500～1000g 即可 ，弃上清，收集沉淀。 3、用手指轻弹细胞 ，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100～200μl 含有 PMSF 的裂 解液的比例加入 Common Lysis Buffer 。通常 6 孔板每孔细胞加入 100ul 裂解液已经 足够 ，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150～200μl。再用手指轻 弹以充分裂解细胞, 充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 4、 10000～12000g，4℃离心 10～15min(如无低温离心机 ，室温下离心亦可), 取上清。 5、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 (三) 组织样本 1、取 Common Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后 ，使