微生物原生质体融合育种技术及其应用.pdfVIP

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 20 10 , 30 ( 1) : 9397 微生物原生质体融合育种技术及其应用 1 2 , 3 1 2 毛 　雨 　王 　丹 　黄 占斌 　邢建民 ( ( ) ) 1 中国矿业大学 北京 化学与环境工程学院　北京 　100083 (2 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室 　北京 　100 190　3 中国科学院研究生院　北京 　100049) ( 摘要 　工业微生物菌种选育在发酵工业 中占有重要地位 。微生物原生质体融合 m icrob ial ) p rotop la st fu sion 技术具有重组频率高 、受结合型或致育型限制小以及遗传物质传递完整等优点 , 是微生物育种最常用的方法之一 。结合相关研究进展 ,分析了原生质体融合技术的组成 ,包括制 备 、再生 、融合的影响因素以及融合子的筛选方法 ,重点评述了原生质体融合技术应用在微生物 育种中的必威体育精装版进展 , 以及微生物原生质体融合技术的发展前景 。 关键词 　微生物 　原生质体融合 　遗传育种 　基因组重组 中图分类号 　Q933 　　微生物菌种是发酵工业中的一个关键因素 , 它决 及其遗传标记选择 ,双亲本原生质体制备和再生 ,亲本 定了发酵过程的成败及某一发酵产品是否具有工业化 原生质体诱导融合 ,融合重组体筛选 ,遗传特性分析和 价值 。自然界中的原始菌株大多不具有很高的工业化 测定 [ 3 ] 。 价值 , 因此需要对菌株进行选育和改良, 以提高产品的 1. 1　原生质体的制备和再生 质量 , 降低成本 。原生质体融合技术是起源于 20 世纪 　　原生质体的制备首先要去除细胞壁 , 当前去壁的 60 年代的一项重要的菌种改良技术 ,是将亲株细胞分 方法主要有机械法 、非酶法和酶法 ,现在使用较多的为 别去除细胞壁后进行融合 ,经基因组间的交换重组 ,获 酶法 。在放线菌和细菌中,主要采用溶菌酶 ,酵母菌和 得融合子的过程 [ 1 ] 。与其他育种技术相 比, 原生质体 霉菌一般用蜗牛酶 、消解酶或纤维素酶等 。影响原生 融合技术具有重组频率高、受结合型或致育型限制小 质体制备和再生的因素很多 :在菌龄上 ,为了使细胞易 以及遗传物质传递完整且不需要完全了解作用机制等 于原生质体化 , 一般选择对数生长期或生长中期的菌 优点 , 因而被国内外微生物育种学者广泛应用 。 体 ,也有的采用生长后期的菌 。酶浓度 以及作用时间 　　 1974 年 , 匈 牙 利 的 Ferenczy[ 2 ] 成 功 将 白地 霉 也会影响原生质体的制备和再生率 , 一般来说酶浓度 ( Geotrichum cand idum ) 营养缺陷型突变株的原生质体 越高 ,作用时间越长 , 原生质体制备率就越高 ,但酶解 进行融合 ,使原生质体融合技术首次应用于微生物中。