草鱼四联佐剂疫苗的制备及特性分析.pdfVIP

· 72 · (总第 135期) 水 利 渔 业 2004年第24卷第5期 草鱼四联佐剂疫苗的制备及特性分析 何福林 ，向建国 (零陵学院，湖南-永州 425006；湖南农业大学，长沙 410128) 摘要：采用PHA作为非特异性免疫刺激剂与出血病毒、荧光假单胞菌、肠型点状产气单胞菌、鱼害粘球 菌4种纯抗原，以最佳方式配合制成四联佐剂疫苗，同时对四联佐剂疫苗的特性进行了分析。结果表明：四 联佐剂疫苗的免疫原性极强，防病效果好。 关键词：草鱼；四联佐剂疫苗；PHA 中图分类号：$948 文献标识码：A 文章编号：1003—1278(2004)05—0072—03 草鱼是我国养殖的主要经济鱼类之一，但因草鱼 “四 1．3．1 出血病疫苗的制备 用组织毒种磨碎后，加 入 病”(出血、烂鳃、肠炎、赤皮)的危害，每年均造成十分严 0、65％的生理盐水稀释，离心取上清液，感染健康草鱼， 重的经济损失。因此，从免疫、药物、生态等角度防治草 取具明显症状 的濒死草鱼 的肝、肾、肌 肉组织称重磨碎 鱼 “四病”的研究不断增多，并获得了一定的效果。实践 后，加入0．65％的生理盐水，使之成 1：5匀浆，再 以3000 证明，这些方法中，以免疫防治最为理想，并相继研制出 r／rain离心0．5h，取上清液，按每毫升加入 800IU青、链 草鱼 出血病组织灭活苗[¨、细胞灭活苗[2I、烂鳃病菌 霉素，并加入福尔马林，使之最后成 0．1％的浓度。置于 苗l3J。不过，这些疫苗均分别存在着防治功能单一，方法 32℃的恒温箱中72h，其间定时摇动。灭活后置于4--8℃ 不便和免疫效果不太理想等缺陷。为研制一种效果显 的冰箱中保存。 著、使用简便的多功能疫苗，本实验采用PHA作为非特 1．3．2 菌苗的制备 将鱼害粘球菌菌种接种于粘球菌 异性免疫刺激剂与精制的抗原以最佳方式配合制成了四 胰胨培养基，28℃温度下培养 48h，将(Ⅱ)、(Ⅲ)菌种分 联佐剂疫苗，该疫苗制造简单、免疫原性极强。与对照组 别接种于胰胨琼脂培养基，28℃培养24h，接着采用无菌 相 比较，防病效果显著。 法将其刮下，用0．65％的生理盐水洗涤 3次后分别收集 于灭菌瓶中I4】。然后按菌液量加入福尔马林，使其最后 1 材料与方法 浓度分别为：(Ⅱ)菌液为0．4％，(Ⅲ)菌液为 0．5％，(Ⅳ) 1．1 毒种、菌种、佐剂 菌液为0．4％。同时置于28℃恒温箱中灭活 24h后进行 本实验所用的出血病毒种 (I)为湖南省水产科学研 无菌检验。无活菌后。再以3000r／rain离心0．5h，取菌 究所提供的出血病鱼的组织浆；菌种分别为：荧光假单胞 体用生理盐水(0、65％)稀释，计数，确定其最终浓度均为 菌(Ⅱ)、肠型点状产气单胞菌(Ⅲ)、鱼害粘球菌(Ⅳ)。这 4．0×10个／mL，置于4～8℃冰箱中保存备用。 3种菌种均 由中国科学院水生生物研究所提供；佐剂 1．3、3 四联佐剂疫苗的配制 将前述 已制备好的4种 PHA从广州市医工所购得。毒种放入 一20℃的低温冰箱 抗原以一定比例混合，按800IU／n 加入双抗即成四联 中保存．菌种放入4--8℃的冰箱中保存。 佐剂疫苗。为探讨四联佐剂疫苗的最佳配比及其主要成 1．2 试验鱼 分的作用，试验中设置了单苗组、联苗组和佐剂组。单苗 试验鱼全部系从鱼苗鱼种原种场购得的当年健康草 组中有5亿个／mL和