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当归多糖对气道上皮细胞损伤后修复的影响 　　作者：王群 作者单位：443611 湖北，秭归沙镇溪中心卫生院 　　【摘要】 目的 研究当归多糖对气道上皮细胞损伤后修复的影响，并初步研究其具体的分子机制。方法 采用气道上皮细胞划痕损伤模型。结果 发现当归多糖在5~50 ng/ml的浓度范围内对损伤气道上皮细胞有显著的促修复作用，且该作用随着浓度的递增而逐步增强，100 ng/ml的当归多糖则对损伤气道上皮细胞的修复有显著抑制作用。当归多糖可显著促进气道上皮细胞EGF的合成，且损伤气道上皮细胞上清液EGF含量与细胞损伤面积显著负相关(相关系数Γ=-0.994，P0.05)。结论 本研究提示当归多糖对损伤气道上皮细胞的促修复作用可能通过其促进气道上皮细胞EGF的合成有关。 　　【关键词】 当归多糖;气道上皮细胞;损伤修复;表皮生长因子 　　气道上皮损伤及异常修复是慢性气道疾病如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease， COPD)发生气道重构的主要原因之一[1，2]，所以促进气道上皮损伤的正常修复尤为重要。当归多糖是当归的主要成分，它作为免疫调节剂和抗放射损伤剂已在临床得到应用。最近有研究发现当归多糖可通过减少过氧化损伤保护肠道黏膜[3]，另一研究显示当归多糖对胃上皮细胞损伤后的修复具有促进作用[4]，但对于当归多糖是否可以促进气道上皮细胞损伤后的修复目前尚未明确。为此，本研究采用人气道上皮细胞系NCI-H292细胞，探讨当归多糖对该细胞损伤后修复的影响，并初步研究其具体的分子机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与主要试剂 人气道上皮细胞系NCI-H292细胞购自中国科学院上海生命科学研究院。胎牛血清购自杭州四季青生物工程公司，GBICO RPMI 1640细胞培养基购自杭州伟孚生物公司。人表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)ELISA检测试剂盒购自美国RD公司。重组人EGF购自美国Peprotech公司。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 细胞培养 NCI-H292细胞置于含10%胎牛血清、50 Μ/ml青霉素、50 Μg/ml链霉素的RPMI-1640培养液中，在37 ℃，5% CO2孵箱中培养，每2天更换一次培养液，每4~5天以1∶3比例传代一次。当归多糖参照文献[4]提取。 　　1.2.2 细胞划痕损伤模型的构建 NCI-H292细胞接种于6孔细胞培养板培养，待细胞融合度达到100%时，采用200 Μl移液器枪头沿培养孔最大横径划过，然后倒置显微镜下拍照，损伤后细胞换用含低浓度胎牛血清(1%)的培养基培养，细胞损伤面积大小采用图像分析软件(Scion Image 4.12)分析，细胞损伤后最初的损伤面积大小定为1，并计算细胞损伤24 h后的损伤面积与最初的损伤面积的比值。 　　1.2.3 当归多糖对损伤气道上皮细胞的干预 细胞损伤后倒置显微镜下拍照，换用含低浓度胎牛血清(1%)的培养基培养，分别加入不同浓度的当归多糖(当归多糖干预的浓度梯度为0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml)进行干预，并以EGF干预为阳性对照(加EGF 10 ng/ml，参考文献[5]设置EGF干预浓度)，分别干预24 h后再次显微镜下拍照，并图像分析软件分析损伤面积。选择对损伤气道上皮细胞的促修复作用较明显的3个当归多糖干预浓度细胞及阴性对照组(0 ng/ml)细胞上清液，ELISA检测干预24 h后细胞上清液EGF的浓度，操作步骤按试剂盒说明书进行。 　　1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0软件对数据进行统计学处理，组间比较采用单因素方差分析，相关性分析采用Spearma相关分析。以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 当归多糖对气道上皮细胞损伤后修复的影响 0 ng/ml，5 ng/ml，10 ng/ml，25 ng/ml，50 ng/ml，100 ng/ml ，EGF(10 ng/ml)的当归多糖干预下，气道上皮细胞损伤24 h后细胞损伤面积分别为0.81±0.04，0.71±0.05，0.56±0.09，0.28±0.03，0.15±0.03，0.91±0.05，0.17±0.02。EGF及5~50 ng/ml当归多糖干预组与不干预组(0 ng/ml)比较均差异有统计学意义(P0.05)，100 ng/ml当归多糖干预组与不干预组(0 ng/ml)比较差异有统计学意义(P0.05)。EGF干预组与50 ng/ml干预组比较差异无统计学意义(P0